煅烧牙本质通过ERK/P38 MAPK信号通路促进骨髓基质细胞的成骨分化

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目的:主要探讨煅烧牙本质(DA)对大鼠骨髓基质细胞的成骨诱导分化能力,并检测MAPKs信号通路在其分化过程中的作用。方法:利用CCK-8法、流式细胞术分析、Edu检测DA对大鼠骨髓基质细胞增殖能力的影响;通过碱性磷酸酶活性测定,碱性磷酸染色,茜素红染色,RT-PCR及Western blot检测DA对细胞的成骨诱导分化作用及相关成骨基因/蛋白的表达情况;制备大鼠颅骨缺损模型(5mm缺损,双侧各一),使用DA进行缺损修复,4周、8周、12周后进行Micro-CT检测,HE染色及IHC染色检测新骨形成情况,组织形态及相关成骨蛋白的表达。利用Western blot检测DA诱导后骨髓基质细胞MAPKs信号通路磷酸化水平;RT-PCR及Westernblot检测MAPKs信号通路被特异性抑制后,DA对细胞的成骨分化相关基因及蛋白的表达情况。结果:DA作用后骨髓基质细胞的增殖能力没有影响,而细胞的碱磷酶活性增高,碱磷酶染色增强,茜素红染色增强。RT-PCR及Western blot显示DA作用后RUNX2/RUNX2,OSX/OSX,OCN/OCN, OPN/OPN,COL-1/COL-1, DSPP/DSPP表达上调。Micro-CT及HE染色显示DA可以促进大鼠颅骨缺损的修复;IHC染色可见RUNX2, OSX, OCN阳性表达均强于未刺激组。此外,Western blot结果显示DA可以激活基质细胞的P38 MAPK信号通路,而RT-PCR结果表明ERK/P38 MAPK通路被特异性抑制后(U0126及SB203580),DA均不能上调RUNX2/RUNX2,OSX/OSX,OCN/OCN的表达水平。结论:DA可促进骨髓基质细胞的成骨向分化,促进骨组织缺损的修复,且ERK/P38 MAPK信号通路在其分化过程中发挥重要作用。
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