【摘 要】
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本研究在对新型鸭呼肠孤病毒TH11株全基因组序列测定的基础上,构建了同时含有T7启动子和DRVTH11株所有基因节段的重组质粒,并在M2节段引入了遗传标记。然后,将这些重组质粒共转染BSR细胞系。观察结果表明,细胞在转染36h出现细胞融合现象,48h出现典型病变。对拯救的病毒分别进行了RT-PCR 和IFA 检测,结果表明能成功扩增出TH11的特异性基因,同时也检测到了遗传标记(HindⅢ)。
【机 构】
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中国农业科学院 上海兽医研究所 上海 200241;安徽农业大学 动物科技学院 安徽 合肥 230036
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛
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本研究在对新型鸭呼肠孤病毒TH11株全基因组序列测定的基础上,构建了同时含有T7启动子和DRVTH11株所有基因节段的重组质粒,并在M2节段引入了遗传标记。然后,将这些重组质粒共转染BSR细胞系。观察结果表明,细胞在转染36h出现细胞融合现象,48h出现典型病变。对拯救的病毒分别进行了RT-PCR 和IFA 检测,结果表明能成功扩增出TH11的特异性基因,同时也检测到了遗传标记(HindⅢ)。
其他文献
马立克氏病(Marek’s disease,MD)是由马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)感染家禽引起的一种淋巴组织增生性疾病.MDV 是α疱疹病毒的重要成员,其感染自然宿主后可迅速诱发T 淋巴细胞瘤,因此MDV 感染是研究病毒性肿瘤病的理想模型.
马立克氏病(Marek’s disease,MD)是由马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)引起的一种高度接触传染的淋巴组织增生性疾病。有研究表明,MDV 造成的免疫抑制多伴有白细胞介素-2(ChIL-2)分泌量下降和反应异常等现象。
Duck hepatitis virus(DHV)affects 1-week-old but not 3-week-old ducks,and causes a more severe disease in the younger ducks.
鸭圆环病毒可感染鸭的免疫系统，造成病鸭的免疫抑制，对养鸭业造成危害.利用PCR方法从福建地区某鸭场疑似鸭圆环病毒(DuCV)感染的病料中，经过全基因组扩增、克隆和测序，获得一株鸭圆环病毒，命名为DuCV/FJ/2011.
为了探讨鸭圆环病毒(DuCV)致病机理,本研究以DuCV 抗原性蛋白Cap为切入点,将截去核定位信号的Cap 基因进行PCR 扩增,T克隆测序正确后将目的片段连到原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达质粒pET-32a-Cap,并转化至宿主菌Rosetta(DE3)。
为构建鸭圆环病毒Cap 基因酵母双杂交诱饵载体，以本实验室分离鉴定的DuCV GH01 株为模板，将扩增的Cap 基因连接到pGM-T 载体，测序正确后，克隆至pGBKT7 载体上，经菌落PCR 及酶切鉴定，转化酵母菌株Y2HGold 感受态，检测诱饵蛋白表达以及诱饵蛋白对酵母细胞毒性和自激活现象。
从临床表现为肝脏坏死性白点为主要病变的病死番鸭肝脏中分离到1株MDRV,该毒株可在DF-1 细胞中增殖并产生明显的细胞病变(CPE).病毒基因组为dsRNA,在SDS-PAGE 中可形成3/3/4 电泳带型.通过单引物扩增技术(FLAC)和生物软件分析可知：该病毒10个基因组片段全长22,967bp,G+C 含量约51.41％；
新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属成员,是鸭出血坏死性肝炎的病原。自2005年以来,鸭出血坏死性肝炎在我国的浙江、福建和广东省流行,且其流行趋势逐年加强,给养鸭业造成较大的经济损失。
参考Genbank 番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S 和M 基因序列设计合成引物,对MDRV 强毒MW9710株和弱毒CA株S基因和M基因组RT-PCR扩增后,进行S和M基因测序和特性分析；提取MDRV 强毒MW9710 株和弱毒CA 株病毒RNA,合成cDNA第一条链和第二条链,构建cDNA文库,进行L基因测序和特性分析。
为了解新型鸭呼肠孤病毒(NDRV TH11 株)σC蛋白的抗原性，本研究采用RT-PCR 方法扩增了NDRVTH11株σC蛋白的编码基因，将其克隆于原核表达载体pET-30a(+)中，转化大肠杆菌 BL21(DE3)，经IPTG诱导表达His-σC重组蛋白.SDS-PAGE 和Western blot 分析表明该重组蛋白获得高效表达，并具有较好的反应原性.