【摘 要】
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以含有绵羊叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒OvPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段,并将其插入原核表达载体pET-30a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pET-OvmDpl.将pET-OvmDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.0 mM IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示绵羊成熟叠朊被大肠杆菌表达.以Ni-NTA树脂纯化表达产物,电泳结
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046
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以含有绵羊叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒OvPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段,并将其插入原核表达载体pET-30a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pET-OvmDpl.将pET-OvmDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.0 mM IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示绵羊成熟叠朊被大肠杆菌表达.以Ni-NTA树脂纯化表达产物,电泳结果显示纯化产物中存在与预计表达蛋白分子量23Ku二倍相当的蛋白条带,分析该蛋白可能是成熟叠朊在大肠杆菌表达时形成的二聚体结构.
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