β-葡萄糖苷酶(E.C3.2.1.21.)能够水解糖苷键,从糖苷或寡糖上释放非还原的末端葡萄糖残基.此酶在古细菌、真细菌和真核生物中广泛存在,并发挥着许多重要的生物学功能,获得更好的高产β-葡萄糖苷酶的优良的过表达菌株可以解决目前β-葡萄糖苷酶产量较低、成本高等问题,进一步推进β-葡萄糖苷酶在多种领域中的应用.本文对实验室从土壤中筛选到的一株斜卧青霉Peni-1进行基因工程改造,主要选取斜卧青霉114-2中六种高效启动子,分别为下列蛋白启动子：甲酸脱氢酶AciA(PDE_1080)、泛素UbiD(PDE_3961)、疏水蛋白RodA(PDE_9832)、磷酸甘油酸酯变位酶PGML(PDE_1335)、葡糖淀粉酶Amy15A(PDE_9417)和纤维二糖水解酶Cbh7A(PDE_7945).应用Double-Joint PCR技术,将高效启动子片段,β-葡萄糖苷酶编码区及终止子片段,以及硫铵吡啶抗性片段ptrA融合之后作为模板,通过巢式PCR,扩增出六种过表达盒,通过转化获得过表达菌株.通过在相同的培养条件下的产酶分析发现,基因aciA(PDE_1080)、pgmL(PDE_1335)和ubiD(PDE_3961)的启动效率较其他三个启动子更高,使β-葡萄糖苷酶酶活分别提高到原始菌株的3.71、3.40、3.64倍.因此本研究通过基因工程改造得到三株产酶优良的菌株.此外,本研究还筛选出三个全新的能够在青霉中应用的高效启动子.