【摘 要】
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稻曲病菌作为水稻重要的致病真菌,引起的稻曲病是水稻上的穗部病害.研究稻曲病菌T-DNA插入失活的突变体库中致病力减弱的突变菌株B-3277的生物学特性,分析其T-DNA插入位
【机 构】
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江苏省农业科学院植物保护研究所,南京210014
【出 处】
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中国植物保护学会第十一次全国会员代表大会暨2013年学术年会
论文部分内容阅读
稻曲病菌作为水稻重要的致病真菌,引起的稻曲病是水稻上的穗部病害.研究稻曲病菌T-DNA插入失活的突变体库中致病力减弱的突变菌株B-3277的生物学特性,分析其T-DNA插入位点的侧翼序列,为稻曲病菌致病机制研究提供方法基础.实验室运用农杆菌介导的稻曲病菌转化技术,获得致病力减弱突变体B-3277.首先测定和观察突变体B-3277的菌落直径,菌落形态,及产孢能力等生物学特性差异,对获得数据进行统计学分析.Southern杂交技术确定外源基因T-DNA插入的拷贝数.进一步采用热不对称交错PCR (thermal asymmetric interlaced,TAIL-PCR)技术获得T-DNA插入位点两端的侧翼序列,并采用生物信息学方法进行分析.研究结果表明,与野生菌株P1相比,突变菌株B-3277在3种固体培养基PSA、TB3和MM中生长速率均有所下降,其菌落形态、色素等方面与野生型无明显差异.同时在马铃薯蔗糖液体培养基(PS)中的产孢能力也有下降.Southern杂交结果显示,外源基因T-DNA在B-3277中以单拷贝的形式插入.TAIL-PCR技术扩增得到紧邻T-DNA两端侧翼序列,右臂347bp和左臂258bp.突变菌株B-3277的生长速率,产孢能力均减弱,其表型变化可能是T-DNA插入影响基因的表达产生的.其侧翼序列的获得,也为进一步研究功能基因奠定了基础.
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