【摘 要】
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根据犬瘟热病毒(CDV)血凝素基因(H)的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,提取CDV弱毒疫苗株的总RNA后,进行RT-PCR,PCR产物经纯化后与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选反向插入的重组质粒,用HindⅢ酶切,经Klenow补平,再用BamH l将H片段切下并回收后克隆到BamH l/EcoR V双酶切的真核表达载体pIRES中,得到重组质粒pIRCDV-H并进行了序列测
【机 构】
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成都军区疾控中心军事医学研究所 成都 650032 解放军军事医学科学院军事兽医研究所 长春 13
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根据犬瘟热病毒(CDV)血凝素基因(H)的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,提取CDV弱毒疫苗株的总RNA后,进行RT-PCR,PCR产物经纯化后与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选反向插入的重组质粒,用HindⅢ酶切,经Klenow补平,再用BamH l将H片段切下并回收后克隆到BamH l/EcoR V双酶切的真核表达载体pIRES中,得到重组质粒pIRCDV-H并进行了序列测定。免疫质粒经纯化后对5只犬进行免疫,以空质粒为阴性对照,8周接种一次,每次接种前采血,测定血清的抗体效价,在第三次接种4周后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7天及14天时采血,测定血清的抗体效价。接种pIRCDV-H疫苗的犬,两次免疫后即可产生较高的抗体水平,攻毒后大部分能抵抗CDV强毒的攻击,虽有发病,但症状较轻,而接种空质粒的对照犬发病严重,证明所构建的核酸疫苗在一定程度上可抵抗CDV强毒的攻击。
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本文应用多态性较好的7对选择性引物组合对26只雌性德国牧羊犬血样DNA进行扩增,共得到可变标记23个。t检验表明:标记E39/T33-22和E39/T38-35与德国牧羊犬的躯干部形态显著相关;标记E39/T49-5与德国牧羊犬的四肢步态显著相关;标记E39/T38-16与德国牧羊犬的受胎率显著相关,表明这些标记可能是调控相关性状的主基因或主效基因,或与之连锁。
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