【摘 要】
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目的 探讨唯BH3蛋白Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)在缺氧致大鼠心肌细胞凋亡中的作用.方法 在体外原代培养出生1-3天的大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定.用脂质体法将Bim-siRNA瞬时转染细胞,制作缺血缺氧损伤模型(转染48h后给予缺氧12h处理).实验分组：(1)正常对照组；(2)缺氧组；(3)缺氧+阴性对照
【机 构】
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南昌大学第二附属医院心内科,江西省分子中心医学重点实验室,江西南昌 330006
【出 处】
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2013中国医师协会中西医结合医师大会
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目的 探讨唯BH3蛋白Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)在缺氧致大鼠心肌细胞凋亡中的作用.方法 在体外原代培养出生1-3天的大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定.用脂质体法将Bim-siRNA瞬时转染细胞,制作缺血缺氧损伤模型(转染48h后给予缺氧12h处理).实验分组：(1)正常对照组；(2)缺氧组；(3)缺氧+阴性对照siRNA组；(4)缺氧+脂质体组；(5)缺氧+Bim-siRNA组.用倒置显微镜观察并记录心肌细胞搏动频率与节律；用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量,以判断细胞损伤情况；用MTT法检测细胞存活率；用流式细胞仪检测细胞凋亡情况；用Western Blotting检测Bim、Caspase-3和p-P38MAPK在心肌细胞中的表达情况.结果 免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功.与空白对照组比较,缺氧刺激后心肌细胞搏动频率明显减慢,节律不规整(P＜0.01),细胞培养液LDH含量增加(p＜0.01),MTT测得心肌细胞存活率下降(P＜0.05),流式细胞仪检测发现细胞凋亡率增加(P＜0.01).而Bim-siRNA转染能抑制缺氧导致的这一作用(p＜0.01或p＜0.05).与缺氧组相比,Bim-siRNA转染组LDH含量减少,细胞存活率增加,细胞凋亡率下降(p＜0.01或p＜0.05),而阴性对照组、脂质体组与缺氧组无明显差异(p＞0.05).Western blotting检测发现缺氧损伤后Caspase-3表达升高(P＜0.05)、p-P38MAPK表达上升(P＜0.01),Bim-siRNA的转染能够显著抑制Bim蛋白的表达(p＜0.01),同时使得Caspase-3表达下降(p＜0.05),p-p38表达也下降(p＜0.01),这与心肌细胞凋亡发生率减低一致,而阴性对照组、脂质体组与缺氧组无明显差异(p＞0.05).结论 Bim-siRNA表达下调能抑制缺氧损伤导致大鼠心肌细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制p-p38MAPK的表达和Caspase3的活化有关,有望为冠心病的治疗提供新方向.
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