入侵广东的木尔坦棉花曲叶病毒侵染克隆构建

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棉花曲叶病是世界棉花生产上毁灭性病毒病,而木尔坦棉花曲叶病毒(Cottonleaf curl Multan virus,CLCuMV)是引起该病害的主要病原之一。自2006年以来,我们陆续在广东及广西多个地点发现朱槿曲叶病和黄秋葵黄脉曲叶病。病原检测、基因克隆与序列分析结果表明,这些病害是由CLCuMV侵染引起的,并伴随有卫星DNAβ分子;进一步比较显示,华南不同地理区域的分离物DNA-A及DNAβ的同源性分别高达98%~100%和96%~100%。这些结果说明,CLCuMV已入侵我国华南地区,对我国棉花生产构成严重威胁。为了研究入侵我国华南地区的CLCuMV致病性,我们分别构建了CLCuMV广东朱槿分离物G6及广东黄秋葵分离物Okra06的DNA-A(2723nt)及其伴随的卫星DNAβ(1346nt)侵染性克隆,pBinPLUS-1.85A和pBinPLUS-2B。农杆菌注射接种本生烟的结果显示,pBinPLUS-1.85A单独接种的植株不表现明显症状,但PCR可检测到CLCuMVDNA-A的存在,说明该病毒可以系统侵染本生烟但症状不明显;pBinPLUS-2β单独接种植株表现轻微的曲叶症状,但在接种植株中PCR未检测DNAβ分子的存在,说明DNAβ依赖病毒DNA-A才能复制;而两者共同接种的本生烟植株表现严重的叶片卷曲和皱缩症状,且在这些显症植株中均可检测到该病毒DNA-A和DNAβ。这些结果说明:所构建的CLCuMV DNA-A及其卫星β分子的侵染性克隆pBinPLUS-1.85A和pBinPLUS-2β均具有侵染性,同时证明了卫星分子DNAB是DNA-A组分诱导寄主植物产生典型曲叶症状所必需的。本研究为进一步开展该病毒致病性和病毒基因功能等研究奠定了基础。
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