橡胶树白粉菌渗透压调控启动子LY-1的克隆及功能分析

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诱导型启动子在正常条件下不或低启动基因转录,在特定条件刺激下才能大幅度提高基因表达,可满足不同试验的需求,最小化外源基因产物对宿主生长及环境的潜在危害。此外,橡胶树白粉菌(Oidium heveae)引起的橡胶树白粉病危害严重,其分子致病机理尚不明确,其诱导型启动子的研究和利用,对加快明确橡胶树白粉菌的分子致病机理提供重要的实验依据。在本实验室前期研究基础上,生物信息学预测得到一个疑似渗透调控型启动子,以橡胶树白粉菌基因组DNA为模板,扩增LY-1启动子,替换掉PBI121载体上GUS基因上游的CaMV35S启动子,构建表达载体LY-1:GUS,将其转入农杆菌GV301。通过花序侵染法将LY-1:GUS载体转入拟南芥,经含有卡那霉素的MS培养基筛选,获得了T1代转基因拟南芥5株。通过GUS染色观察,在转基因拟南芥的叶片、根、茎等组织中均有显色反应;对转基因烟草植株进行PCR扩增,均可检测到GUS基因及LY-1启动子,表明LY-1及GUS基因已成功转入拟南芥中;通过500mmol/L、400mmol/L、300mmol/L、200mmol/L、100mmol/LNaCl分别处理转基因拟南芥幼苗,组织化学染色结果表明,未经盐胁迫处理的拟南芥GUS基因表达量低,300mmol/LNaCl处理后的拟南芥GUS基因表达量明显升高,结果表明LY-1启动子是一个盐胁迫诱导型启动子。该研究为进一步研究橡胶树白粉菌启动子的调控机制奠定基础。
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