【摘 要】
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本研究利用生物信息学和比较基因组学技术注释拼接得到柔嫩艾美耳球虫酰基甘油酯酶的基因序列,以预测的序列设计特异性引物,以E.tenella第二代裂殖子总RNA为模板,用RT-PCR的方法扩增出Etmagl全长序列；通过在线软件对其进行生物信息学分析。本研究首次注释、克隆了柔嫩艾美耳球虫酰基甘油酯酶的基因,并进行了重组表达,系统分析了重组蛋白的体外活性及相关生化特征,建立了一个以EtMAGL为靶标的抑
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广州510642;广东省农业科学院动物卫生研究所,广州510640 广东省农
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究利用生物信息学和比较基因组学技术注释拼接得到柔嫩艾美耳球虫酰基甘油酯酶的基因序列,以预测的序列设计特异性引物,以E.tenella第二代裂殖子总RNA为模板,用RT-PCR的方法扩增出Etmagl全长序列；通过在线软件对其进行生物信息学分析。本研究首次注释、克隆了柔嫩艾美耳球虫酰基甘油酯酶的基因,并进行了重组表达,系统分析了重组蛋白的体外活性及相关生化特征,建立了一个以EtMAGL为靶标的抑制剂体外筛选模型,并发现了JZL 184对Et-MAGL具有一定的抑制活性,为新型抗球虫药物的研发和潜在靶标的筛选奠定了理论基础.
其他文献
本研究主要目的是研究柔嫩艾美尔球虫组织蛋白酶L的基因和蛋白结构,揭示其原核表达规律.选用未孢子化的柔嫩艾美尔球虫houghton株,通过与弓形虫的cathepsinL进行BLASTP找到其保守结构域,利用RT-PCR和RACE技术,分别获得其保守结构域和cDNA的5’和3’端序列,并将其重组于pET28-a(+),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转入大肠杆菌Transetta(DE3)进行诱导表达.
本研究旨在调查奎屯地区奶牛养殖场奶牛球虫感染与流行情况,并根据调查结果进行驱虫方案的设计,为奶牛球虫病的防治提供理论依据.试验选取奎屯不同地区的5个规模化奶牛养殖场,直肠采集2:3月龄、6月龄、1-2岁、5-6岁四个年龄段奶牛的粪便,分别为:91份、95份、73份、31份,共290份；采用饱和蔗糖水漂浮法和离心沉淀法进行阳性样品的确定、卵囊的搜集；2.5％的重铬酸钾进行孢子化并置于室温下进行卵囊的
Toxoplasma gondii and Eimeria mitis are closely related apieomplexan parasites.The surface antigen 1 of T.Gondii (TgSAG 1) is a major immunodominant antigen and is considered to be a good candidate fo
本试验利用显微操作的方法分离斯氏艾美耳球虫和中型艾美耳球虫单个卵囊,利用阴离子去污剂SDS和蛋白酶K孵育,并结合液氮冻融的方法对卵囊进行裂解.继而利用引物延伸预扩增技术对裂解后获得的单卵囊基因组进行随机扩增.最后利用11个兔球虫种ITS-l基因的特异性引物对PEP产物进行巢式PCR鉴定.结果表明,结合PEP技术,成功建立了单卵囊PCR鉴定方法.该方法能够实现在单个卵囊基础上对具有种鉴定意义的靶基因
In the present study,we determined the complete mitochondrial DNA (mtDNA) sequence of Eimeria magna from rabbits for the first time,and compared its gene contents and genome organizations with that of
本文从E.Tenella扬州株纯化的配子体中提取总RNA,经RT-PCR扩增出Etgam22基因片段.将目的片段插入到pGEM-T-Easy载体,常规转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,蓝白斑筛选后,对经酶切和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序.以黄羽肉鸡为试验动物,以平均增重、相对增重率、病变记分与卵囊减少率等为评价指标,对重组蛋白的免疫保护效果进行了初步研究,并对其诱导的特异性免疫应答水平进行了检
本研究以柔嫩艾美耳球虫cDNA和鸡脾脏cDNA为模板,参照GenBank登录序列设计引物,引物上下游加入酶切位点,扩增了柔嫩艾美耳球虫顶体膜蛋白1基因(EtAMAl)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(EtSerpin)、棒状体颈部蛋白2基因(EtRON2)、钙依赖蛋白激酶3基因(EtCDPK3)等4种球虫基因和鸡IFN-γ基因,经测序验证后,将4种球虫基因分别插入pCAGGS真核表达载体,构建了该4种基因的真
本研究采用堆型艾美耳球虫pcDNA3-3-1E-PLGA微球口服缓释疫苗免疫雏鸡,观察其对雏鸡细胞免疫和体液免疫功能的影响,为鸡球虫DNA疫苗提供新的剂型.将7日龄雏鸡随机分为3组,即空白对照组、裸质粒DNA疫苗堆型艾美耳球虫pcDNA3-3-1E口服免疫组和DNA微球疫苗堆型艾美耳球虫pcDNA3-3-1E-PLGA微球口服免疫组,每组30只.免疫剂量为50μg/只,7日龄免疫1次,14日龄加强
对鸡堆型艾美耳球虫相关抗原基因ADF和3-1E进行重组克隆及共表达研究,为研制鸡球虫重组疫苗奠定基础.应用重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将鸡堆型艾美耳球虫ADF基因和3-1E基因重组构建ADF-3-1E融合基因,将融合基因插入到pET-32a(+)载体中,构建pET-32a(+)-ADF-3-1E共表达载体,转化Rosetta(DE3)宿主菌中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和W
为了探讨入侵相关蛋白的串联表达及新型免疫程序PrimE-Boost法对鸡体感染柔嫩艾美耳球虫的免疫保护作用.以本课题组所获得四种入侵相关蛋白分子为基础,生物信息学分析其关键功能结构域,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术连接功能结构域的表达基因,分别对串联基因进行原核、真核表达,应用新型免疫程序DNA抗原首次免疫及嵌合蛋白增强免疫法对鸡体进行免疫-3日龄首免DNA抗原,10日龄加强免疫嵌合抗原