【摘 要】
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<正>RhoA是Rho GTPases中的一种,在调控细胞骨架、增殖、凋亡、黏附、浸润及转录等细胞信号转导途径起着至关重要的作用。我们先前已证实砷剂联用大黄素,通过提高细胞内活性
【机 构】
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上海第二医科大学细胞生物学教研室;
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<正>RhoA是Rho GTPases中的一种,在调控细胞骨架、增殖、凋亡、黏附、浸润及转录等细胞信号转导途径起着至关重要的作用。我们先前已证实砷剂联用大黄素,通过提高细胞内活性氧(ROS), 可明显增强肿瘤细胞的凋亡。本实验通过体外砷剂联用大黄素诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡,阐明RhoA在氧化应激调控下的作用机制。免疫组化显示胃癌的分化程度越低,RhoA表达的阳性率越高。通过转染RhoA的野生型(WT)、活化型(V14)和负性(N19)质粒及RhoA下游效应分子 ROCK的抑制剂Y-27632的作用,发现RhoA可以轻度升高ROS和转录因子NFκB活性。在砷剂联用大黄素处理后,明显抑制SGC-7901细胞的增殖,并具有剂量和时间效应。抗氧化剂NAC逆转此效果。转染V14RhoA明显促进细胞的增殖能力,同时V14RhoA抑制ROS的产生,并明显提高转录因子NFκB活性。提示过度激活的RhoA在药物作用下通过抑制ROS,促进NFκB激活而发挥促存活抗凋亡作用。免疫印迹显示各处理组的总RhoA的表达量变化不明显,但砷剂联用大黄素处理组的RboA活性明显降低。用激光共聚焦显微镜观察到V14RhoA转染的细胞RhoA表达集中在胞膜上, F-actin也聚集于胞膜下形成应力纤维,药物联用处理后胞膜RhoA荧光减低,分散于胞质中,同时 F-actin荧光强度明显减弱,并有凋亡发泡现象。这些结果表明RhoA受氧化应激调控,其抗凋亡作用可被砷剂联用大黄素所抑制,并促使凋亡细胞形态改变。
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