目的 SELEX技术是一种组合化学新技术,应用该技术可从人工合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选出能与靶分子高特异性、高亲和力的核酸适配子.适配子功能类似抗体,但某些特性优于抗体,在疾病的诊断中有良好的应用前景.本研究以肝癌血清为靶标进行适配子的SELEX筛选,旨在为建立基于适配子的肝癌诊断新技术奠定基础.方法 (1)收集原发性肝癌患者和正常人的血清标本,并分别制备肝癌混合血清和正常混合血清；(2)设计并合成单链随机寡核苷酸文库和引物； (3)先用正常混合血清进行3轮消减SELEX筛选,以去除文库中与正常血清成分结合的核酸序列,再以肝癌混合血清为靶标进行9轮正向SELEX筛选,以获得肝癌血清特异的核酸序列；(5)对最后一轮筛选后的亚文库中的核酸序列进行克隆测序,分离单一适配子,并对各适配子的二级结构进行模拟分析和同源性比对分析； (6)将梯度量适配子分别与肝癌混合血清和正常混合血清孵育、聚丙烯酰胺凝胶电泳和游离适配子带灰度测定,评价适配子与肝癌血清结合的特异性；(7)将梯度量适配子与肝癌混合血清孵育、聚丙烯酰胺凝胶电泳和结合适配子带灰度度测定,测定适配子与肝癌血清结合的亲和力(Kd).结果 (1)经过3轮消减筛选和9轮正向SELEX筛选,成功分离出209个核酸序列,它们两端序列固定与文库序列相同,中间的序列各不相同,表明成功筛选出一组肝癌血清适配子； (2)适配子的二级结构模拟分析显示结构丰富,主要有口袋形、发卡形、棒形和球拍形等；序列聚类分析分析显示适配子分为3个家族,同源性序列比对发现有多个保守基序；(3)多数适配子与肝癌血清的结合带明显强于正常血清,而游离带则相反,游离适配子带的最大比值在1.07～6.61之间,平均1.90 2±0.77,表明适配子与肝癌血清有不同程度的特异性结合；(4)选择了具有明显结合条带的10个适配子进行亲和力分析,Kd值介于46nM～640nM之间,表明多数适配子与肝癌混合血清具有较好的亲和力.结论 成功建立起以血清为靶标的适配子筛选技术并筛选出一批肝癌血清适配子；这些适配子可能针对血清中多种不同的靶标和结合位点；多数适配子与肝癌血清有不同程度的特异性结合；部分适配子与肝癌混合血清结合有较强的亲和力.