【摘 要】
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目的 构建和初步鉴定pEGFP-N1-HBsAg-ROP2重组表达载体. 方法 根据HBsAg基因序列和pcDNA3-ROP2-P30 重组质粒酶切位点等设计引物,进行PCR 扩增,获得HBsAg基因,再通过酶切
【机 构】
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272033 济宁,山东省寄生虫病防治研究所
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目的 构建和初步鉴定pEGFP-N1-HBsAg-ROP2重组表达载体. 方法 根据HBsAg基因序列和pcDNA3-ROP2-P30 重组质粒酶切位点等设计引物,进行PCR 扩增,获得HBsAg基因,再通过酶切、连接、转化等将HBsAg 基因替换至重组质粒中,构建pcDNA3-ROP2-HBsAg 重组质粒;PCR 扩增得到HBsAg-ROP2 片段后,采用酶切等技术与pEGFP-N1 载体相连接,从而构建pEGFP-N1-HBsAg-ROP2 真核表达载体,并进行酶切、PCR 扩增、测序等初步鉴定.结果 PCR 扩增出HBsAg基因片段,片段大小约700bp,与理论值相符.构建的pcDNA3-ROP2-HBsAg重组质粒经酶切后产生约5.4kb 的空载体片段和约1.9kb ROP2-HBsAg 片段条带,测序结果表明该重组载体完整包含了HBsAg 和ROP2 基因.pEGFP-N1-HBsAg-ROP2 重组表达载体双酶切后产生4.7kb 的空载体片段和约1.9kb ROP2-HBsAg 片段条带,测序结果表明该重组载体包含了HBsAg和ROP2基因片段.结论 pEGFP-N1-HBsAg-ROP2 重组表达载体构建成功,为进一步研究弓形虫乙肝复合多基因疫苗奠定了基础.
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