保证基因组准确的复制和传递是所有生命体生存与繁衍的基础.真核细胞都有一整套复杂精确的机制来实时监控与协调DNA复制进程,这个过程被称为DNA复制检验点或S期检验点.目前关于应对外界环境因子引起的DNA损伤应答的研究相对较为深入,现有的S期检验点通路模型也绝大多数来自于细胞应对羟基脲等外界药物胁迫的研究.然而,如果突变发生在直接参与DNA复制的基因中,DNA复制叉内部出现功能异常,细胞是如何应对这类内部威胁的呢?构建了po12G564D酵母突变株。该突变菌株在37℃表现出明显的温度敏感,FACS分析显示其S期延滞.另外,Po12同源蛋白Pfu DNA聚合酶中相应位点的突变导致聚合活性的明显下降.这些结果都暗示着该位点突变导致DNA复制活性下降,复制速度变慢.结果表明该突变株存在DNA复制缺陷,DNA复制叉行进速度变慢或前导链/滞后链合成的不同步化会激活Mec1/Rad5检验点通路，从而保证细胞维持基因组稳定性和正常生长。由于DNA复制及其检验点在真核生物中的高度保守性，构建的前导链DNA复制缺陷模型以及对可能的检验点通路进行的遗传分析，将有助于更深入地研究真核生物细胞维持基因组稳定性的多重分子机制。