近年来的研究表明,胚胎组织的微环境可通过表观遗传学机制使肿瘤细胞逆向转化为表型正常的细胞,nodal信号蛋白的抑制因子lefty在该过程中发挥了十分关键的作用。由于lefty可以逆转肿瘤的表型而对正常的细胞没有影响,这一发现为肿瘤的治疗提供了新的分子靶点。但lefty在胚胎干细胞中呈高水平表达,在正常的组织和肿瘤组织中呈低水平表达。目前原核生物的表达系统制备的基因重组蛋白由于缺乏糖基化修饰药效很低,采用真核细胞表达系统面临蛋白产量较低、造价昂贵和临床使用不便的缺点。本研究提出采用细胞微囊化技术局部缓释lefty对肿瘤进行逆转化治疗的设想。本研究构首先构建了pCDNA3.1-LEFTY1和plRES-GFP-LEFTY2重组体质粒,然后通过细胞转染技术构建了稳定表达lefty蛋白的HEK293-pIRES--GFP-LEFTY2和HEK293-pCDNA3.1-LEFTY1细胞株,构建的pIRES-GFP双表达表达系统能够有效的监控lefty2的表达效率。利用高压静电微囊发生器将微囊的直径控制在100μm左右,将稳定表达lefty蛋白的HEK293细胞株包覆到海藻酸钠微囊内,成功构建了缓释lefty的微囊化系统。利用western blot检测leftyl和lefty2蛋白能够缓释到培养基中。将该缓释系统植入CD1小鼠体内,利用ELISA技术检测了lefty1在小鼠血清内的含量达到到108ng/ml。利用与乳腺癌细胞MDA-MB231进行共培养研究,研究体外缓释lefty蛋白能够抑制肿瘤细胞的增殖。为进一步利用该系统用于肿瘤逆转治疗的研究奠定了基础。