基于湿法超微提取技术的“膜-凝胶耦合”纯化地龙纤溶活性蛋白的研究——动物类中药提取分离关键技术研究(Ⅰ)

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地龙湿法超微粉碎提取液通过MWCO 50kDa PES膜后,基本可以去除大相对分子质量蛋白(>50 kDa);通过MWCO 6kDa PES膜后,可基本去除多肽、核酸等小分子物质.经膜分离纯化的蛋白,通过Sephadex G-75色谱分离后,最终获得三组高纯度蛋白,其中LK1具有纤溶蛋白活性.LK1经过胰蛋白酶酶解后,通过质谱分析,将其肽质量指纹图谱(PMF)与数据库(NCBI)中理论的肽质量指纹加以比较,推测其同源蛋白为:gi|157103994;来是黑斑蚊的占替诺烟酸盐磷酸核糖基转移酶.本研究与目前国内外蛋白纯化方法相比,蛋白纯化步骤得到较大的简化,纯化效率得到很大的提高.说明膜与凝胶耦合纯化蛋白具有独特优势.膜与凝胶耦合的工艺技术有望推广至其他动物类天然产物提取液中蛋白的纯化.
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