【摘 要】
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目的：构建结核分枝杆菌pncA基因的原核表达质粒,获得结核分枝杆菌吡嗪酰胺酶的表达蛋白。方法：制备结核分枝杆菌基因组DNA,采用聚合酶链反应扩增目的基因片段；通过pET28a构
【机 构】
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HenanProvinceCenterforDiseaseControlandPrevention,Zhengzhou450016China河南省疾病预防控制中心,河南郑州450016JohnsHop
【出 处】
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2012科学研究与结核病防治高峰论坛
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目的：构建结核分枝杆菌pncA基因的原核表达质粒,获得结核分枝杆菌吡嗪酰胺酶的表达蛋白。方法：制备结核分枝杆菌基因组DNA,采用聚合酶链反应扩增目的基因片段；通过pET28a构建表达载体pET28a-pncA,序列测定证实正确后转化大肠埃希菌DH10b,经IPTG诱导表达His-吡嗪酰胺酶融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白。结果：扩增出结核分枝杆菌pncA基因并构建了具有正确基因序列的质粒载体pET28a-pncA,转化大肠埃希菌BL21后经诱导产生了分子质量单位约20 ku的表达产物,并得到纯化的带His标签的目的蛋白。结论：构建了结核分枝杆菌pncA基因原核表达质粒,并诱导表达了His-吡嗪酰胺酶融合蛋白,为进一步研究吡嗪酰胺耐药性奠定了基础。
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