【摘 要】
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方法:为了研究高效广谱的基因工程抗病毒制剂,本研究使用全基因合成方法,合成了编码猪干扰素成熟肽的基因全序列,并克隆入pET28a载体中进行原核表达,使用原核细胞发酵罐对表
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所 吉林 长春 130062
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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方法:为了研究高效广谱的基因工程抗病毒制剂,本研究使用全基因合成方法,合成了编码猪干扰素成熟肽的基因全序列,并克隆入pET28a载体中进行原核表达,使用原核细胞发酵罐对表达菌株扩大培养,表达融合重组猪干扰素蛋白,对蛋白进行变性、复性和脱盐处理,采用病变抑制法测定rPIFN在PK15细胞上抗VSV病毒的增殖活性.结果:合成的基因全长501bp,编码166个氨基酸:表达的蛋白分子量为2万Da左右,与预期的大小一致.使用15升的发酵罐,高密度发酵,培养工程菌的密度可达到100克/L湿菌.每克可获得0.5毫克纯品rPIFN.经纯化后的蛋白纯度超过98％,纯化后的蛋白在PKl5细胞上抗VSV病毒的活性为2×107U/mg.结论:本研究成功地表达和纯化了rPIFN蛋白,生产成本低廉,为开发治疗猪的病毒病高效生物制剂打下了基础.
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