论文部分内容阅读
本实验通过RACE方法克隆得到泥蚶三种金属组织蛋白酶抑制因子，分别命名为Tg-TIMP-2-like、Tg-TIMP-3-like和Tg-TIMP-4-like，全长分别为869bp、804bp和1164bp;分别编码236、189、222个氨基酸;推导分子量为26.94kDa、20.73kDa和22.67kDa;理论等电点分别为8.38、8.67和8.00。Signa1P3.0分析表明Tg-TIMP-3-like拥有一个含16个氨基酸的信号肽，Tg-TIMP-4-like拥有一个含23个氨基酸的信号肽，这个信号肽在高度保守的Cys-X-Cys(泥蚶中X为Tyr)上游切除。Tg-TIMPs-like与其他贝类的TIMP氨基酸序列比对显示相似性在24.4％-45.6%。利用Mega5.05构建进化树发现TIMP蛋白聚为2大分支，即脊椎动物和无脊椎动物，脊椎动物TIMP分支又包括四个分支(TIMP-1,2,3,4)，因此推断脊椎动物的TIMP可能是依据其结构进行分类，而无脊椎动物TIMP研究较少，分类不明显，目前未发现无脊椎动物含有类似TIMP-1基因。荧光定量qRT-PCR检测显示Tg-TIMPs-like基因在血液、肝胰腺、闭壳肌、斧足、外套膜和鳃组织中均有表达，且不同的TIMP基因的组织分布有所不同。发现Tg-TIMP2-like基因在外套膜中表达最大，鳃中次之;Tg-TIMP3-like基因在鳃中表达最大，外套膜中次之;Tg-TIMP4-like基因在血液中表达最大，鳃中次之。血细胞是免疫反应的主要细胞成分。鳃是贝类的呼吸器官，对水中的细菌和有毒物质起到过滤的作用，是免疫防御的第一道屏障。而外套膜也是与外界接触最直接的，也是作为抵御外界细菌和有毒物质的第一道防线。根据三种TIMP基因在组织中的表达量，推测其可能在免疫防御中会起重要的作用。