论文部分内容阅读
灰葡萄孢引起植物灰霉病，寄主达200多种植物，造成严重的经济损失。一般认为该菌的致病因子包括细胞壁降解酶、毒素及激素等。本文从分子水平上探究灰葡萄孢的致病性及其机理，从而为制定持久控制灰霉病的策略提供理论依据和实践基础。以灰葡萄孢菌株RosaBC-3为材料，采用农杆菌介导转化技术获得了1000多个插入突变体，采用离体油菜叶片接种技术筛选出了9个致病力增强的突变体和12个致病力完全丧失的突变体。分析其生物学特性，并用PCR方法对其T-DNA侧翼序列进行克隆，将获得的序列信息与NCBI及Broad Institute B.cinerea BO5.10 database中的序列比对进行分析。结果发现:突变体AT15的生长速度稍慢于出发菌株RosaBC-3;分生孢子产量与出发菌株无显著差异(P>0.05)，在1％的葡萄糖溶液中经8h培养后萌发率显著低于出发菌株;菌丝块在洋葱表皮接种12h后，形成的侵染结构数量与出发菌株无显著差异(P>0.05)。该菌株中T-DNA插入在B.cinerea BC1G-00493基因前17bp处，该基因全长594bp，编码198氨基酸的假定蛋白，含有一个内含子，分析后发现该假定蛋白没有己知功能的功能域。突变体AT239的生长速度、侵染结构数量与出发菌株均无显著差异(P>0.05);不产生分生孢子;产酸的平板试验表明其产酸量高于出发菌株;菌丝块在洋葱表皮接种12h后，洋葱表皮可以发病，发病率为19%。该菌株中T-DNA插入在BC1G-03701基因前653bp处，该基因全长1548bp，编码433aa的保守假定蛋白，含有2个内含子，该假定蛋白含有DUF2414 super family domain，该结构域在真菌和哺乳动物中都是保守的，但是功能未知。这两个基因在B.cinerea致病中的功能未见研究报道，需要通过敲除与互补等试验进一步验证其功能。