【摘 要】
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本研究采用流加补料培养方式培养重组Pichia pastoris,表达血管生长抑制素(Angiostatin).整个培养过程分为以甘油为碳源的生长阶段和以甲醇为碳源的诱导阶段.全过程用氨水调节pH时,诱导阶段菌体生长受到抑制,蛋白的最大表达量为9.08mg/L.进行不同氨离子浓度的摇瓶培养,证实在以甲醇为碳源时,氨离子浓度对菌体的生长有明显的影响.改用2mol/L的KOH溶液调节pH,诱导阶段菌体
【机 构】
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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室(上海) 中国科学院生物化学研究所(上海)
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本研究采用流加补料培养方式培养重组Pichia pastoris,表达血管生长抑制素(Angiostatin).整个培养过程分为以甘油为碳源的生长阶段和以甲醇为碳源的诱导阶段.全过程用氨水调节pH时,诱导阶段菌体生长受到抑制,蛋白的最大表达量为9.08mg/L.进行不同氨离子浓度的摇瓶培养,证实在以甲醇为碳源时,氨离子浓度对菌体的生长有明显的影响.改用2mol/L的KOH溶液调节pH,诱导阶段菌体有缓慢的生长,蛋白最大表达量增为20mg/L.
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研究了产甘油的耐高渗酵母在热刺激、高渗透压和乙醇等逆环境中海藻糖的积累情况.结果表明,克鲁氏假丝酵母在不利环境生长时,胞内海藻糖会大量产生,随着对环境的适应,海藻糖又会迅速的被降解.在不同渗透压环境下生长的酵母细胞被转移到更高的渗透压环境中时,细胞存活量与原来所处渗透压的高低有关.
本文考察了烷烃的加入时间和加入量对细胞色素P450酶的诱导及产酸量的影响,提出了发酵新工艺,即在开始上罐时并不加入烷烃,或加入少量的烷烃,使菌体得到快速的生长.进入指数生长期后期加入烷烃诱导6-8小时后,再调节发酵体系的pH值转入产酸期.实验结果表明:新工艺在诱导P450酶及产酸量方面都优于旧工艺,新工艺条件下可将P450酶系诱导量提高14.56℅,产酸量也提高了14.15℅.
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