PKCα亚型对视网膜色素上皮细胞移行影响的实验研究

来源 :2013年第十九届全国眼外伤学术研讨会暨整合眼外科技术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:johnnywong
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  目的:通过体外实验探讨PKCα对人RPE移行的影响。方法:人眼RPE细胞在体外培养后,分为空白对照组、thymeleatoxin(PKCα激动剂)组、siRNA-PKCα(PKCα抑制剂)组和nonsilencing siRNA组,通过RT-PCR实验检测人RPE细胞内PKCα表达水平的差异,通过细胞划痕、Transwell实验、活细胞动态实验检测PKCα对人RPE细胞移行的作用,通过激光共聚焦显微镜(Laser scanning confocal microscope,LCSM)观察紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达。结果:RT-PCR实验结构显示:thymeleatoxin组的人RPE细胞内PKCαmRNA的含量明显高于空白对照组;siRNA-PKCα组的人RPE细胞内PKCαmRNA的含量明显低于nonsilencing siRNA组细胞。细胞划痕、Transwell实验、活细胞动态实验等方法显示:thymeleatoxin组细胞的移行速度、跨膜细胞数、细胞活力等均明显优于空白对照组,siRNA-PKCα组细胞的移行速度、跨膜细胞数、细胞活力等均明显弱于nonsilencing siRNA组;移行后,thymeleatoxin组、siRNA-PKCα组和nonsilencing siRNA组的ZO-1蛋白免疫荧光强度均弱于空白对照组,且各组ZO-1蛋白免疫荧光强度均弱于移行前;移行前后occludin蛋白的表达均弱。结论:PKCα对人RPE细胞的移行有上调作用,提示PKCα可能为PVR的防治提供新的药物靶点。
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