视网膜血管内皮细胞(RVECs)的体外培养是进行视网膜血管性疾病研究的基础,人眼球供体的缺乏是限制人血管内皮细胞培养的主要原因,与人高度同源的大鼠血管内皮细胞的培养方法已经建立,但其分离方法对细胞损伤较大,影响细胞的培养效率.目的 建立和改良大鼠RVECs的培养方法.方法 选取5只SD大鼠眼球,获得视网膜,用组织块培养法,将大鼠视网膜用质量分数0.1％胶原酶消化,并加入质量分数20％胎牛血清、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长添加物(ECGS),用血管内皮细胞培养基中和后充分吹打,制备细胞及组织悬液,接种于人纤维粘连蛋白(FN)包被的培养瓶中.用Ⅷ因子相关抗体鉴定培养的内皮细胞.结果 组织块法消化培养2d可见细胞从组织块游出,培养4d可伸出触角呈梭形,5～6 d可融合生长,培养14d后的细胞呈单层生长,培养的细胞Ⅷ因子相关抗体染色阳性.传代培养的细胞接种2h可重新贴壁,恢复融合生长状态.结论 视网膜组织块培养并用胶原酶消化可获得活性较强的细胞和碎片,再用高选择性的血管内皮细胞培养基和FN促贴壁进行选择性培养,可获得纯度较高的RVECs.