【摘 要】
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牛传染性鼻气管炎对养牛业造成较大危害,是进出口牛检验检疫主要关注的疫病之一.本研究针对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)高度保守的gC基因设计单标记并具有自身荧光淬灭功能的
【机 构】
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广东出入境检验检疫局,广州,510623
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牛传染性鼻气管炎对养牛业造成较大危害,是进出口牛检验检疫主要关注的疫病之一.本研究针对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)高度保守的gC基因设计单标记并具有自身荧光淬灭功能的LUXTM引物,建立LUXTM新型实时荧光PCR方法用于快速检测IBRV.试验表明,该法对四株IBRV细胞培养物的检测均呈典型阳性反应,而对其他常见牛病毒和动物疱疹病毒以及健康牛组织DNA和细胞对照的检测结果为阴性,检测时间包括核酸提取仅需1～2小时.试验表明,LUXTM荧光PCR法对IBRV细胞增殖病毒液的检测敏感性可达0.04TCID50,比病毒分离敏感性至少提高10倍;对系列稀释的纯化IBRV核酸样品,LUXTM荧光PCR的检测敏感性比常规PCR可提高达103倍.将病毒液添加到健康牛精液和血液样品中,该LUXTM荧光PCR可检测到牛冻存精液中40 TCID50、以及牛抗凝全血、血清和临床精液中0.04 TCID50的病毒.本研究所建立的LUXTM荧光PCR法快速敏感,适合应用于对活牛及其遗传物质的进出口检疫、养牛业疾病防控等领域快速检测IBRV.
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