【摘 要】
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本实验根据BWl-B02的EST序列,利用RACE技术扩增获得了一个含完整开放阅读框的cDNA序列,结果显示其具有1个HSPs家族alpha-crustallin-HSPs_p23-like superfamily的保守结构域.
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海200241
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本实验根据BWl-B02的EST序列,利用RACE技术扩增获得了一个含完整开放阅读框的cDNA序列,结果显示其具有1个HSPs家族alpha-crustallin-HSPs_p23-like superfamily的保守结构域.与柔嫩艾美耳球虫基因组进行同源性比对,发现该基因与柔嫩艾美耳球虫的Hsp20有高度同源性,为了进一步研究该蛋白在虫体发育过程中的功能,将获得的EtsHSP基因与原核表达质粒pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒(pET28a(+)-EtsHSP)后转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达获得了重组表达蛋白rEtsHSP.用获得的重组蛋白免疫兔制备了兔抗rEtsHSP的多克隆抗血清.Western blot分析显示制备的兔抗rEtsHSP多克隆抗血清能识别大约20 kDa的虫体天然蛋白,且蛋白的表达在孢子化卵囊阶段高于其他3个阶段.利用间接免疫荧光抗体标记对EtsHSP在柔嫩艾美耳球虫子孢子的分布进行了分析,发现该蛋白主要位于细胞核周围.体外抑制试验结果显示,子孢子与所制备的抗体孵育后,其入侵DF-1细胞的能力减弱.以上研究结果,为进一步深入研究球虫sHSP的功能提供了重要参考依据.
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