【摘 要】
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椰子泻血病是海南椰子树的重大病害，其病原为奇异长喙壳菌(Ceratocystis paradoxa)。通过溶壁酶酶解菌丝体成功制备奇异长喙壳菌原生质体，用抗潮霉素基因作为选择标记，采用PEG介导的原生质体转化法，用绿色荧光蛋白表达载体(pCT74-sG-FP)转化原生质体，获得表达GFP奇异长喙壳菌的转化子菌株；转化子菌株在含潮霉素平板上经多次纯化后，在无选择压下连续继代培养仍能发出稳定而强烈的绿
【机 构】
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中国热带农业科学院椰子研究所,海南省热带油料作物研究中心,文昌571339;福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室,福州350002
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椰子泻血病是海南椰子树的重大病害，其病原为奇异长喙壳菌(Ceratocystis paradoxa)。通过溶壁酶酶解菌丝体成功制备奇异长喙壳菌原生质体，用抗潮霉素基因作为选择标记，采用PEG介导的原生质体转化法，用绿色荧光蛋白表达载体(pCT74-sG-FP)转化原生质体，获得表达GFP奇异长喙壳菌的转化子菌株；转化子菌株在含潮霉素平板上经多次纯化后，在无选择压下连续继代培养仍能发出稳定而强烈的绿色荧光。用GFP特异性引物PCR扩增转化子菌株基因组DNA获得预期大小片段，表明外源基因已成功导入奇异长喙壳菌基因组中，且稳定遗传；GFP标记菌株生长正常，致病性和野生型菌株无明显差别。今后将利用该标记菌株，进一步研究奇异长喙壳菌在植物体内的侵染和扩增特性，为最终明确该病菌的致病机制奠定基础。
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sRNA深度测序技术是发现新病毒,监控病毒变异的组学研究技术,可直接以宿主中sRNA为研究对象,快速鉴定宿主中病毒组成.本试验于本氏烟5～6叶期设喷清水对照(SO1)、喷云芝多糖(S02)、接病毒(S03)3个处理,3次重复,处理72h后采摘各处理顶部第2片烟叶干冰送样,混样提取总RNA,构建small RNA文库经HiSeq 2500测序,读长为单末端50 nt.
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