【摘 要】
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目的 体外建立人肥大细胞脱颗粒模型对研究Ⅰ型超敏反应和抑制由IgE介导的过敏性疾病具有重要意义.从入骨髓及脐血中分离诱导培养的肥大细胞,成本昂贵、培养周期较长,因此获得永生化人肥大细胞系用于过敏反应研究显得格外重要.目前应用较多的肥大细胞系有大鼠嗜碱性粒细胞来源的RBL-2H3细胞,小鼠肥大细胞瘤P815细胞,人肥大细胞系有HMC-1细胞和LAD2细胞.人肥大细胞系HMC-1的IgE高亲和力受体(
【机 构】
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第三军医大学大坪医院皮肤科 400042
【出 处】
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中华医学会2013年全国变态反应学术会议东亚变态反应论坛
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目的 体外建立人肥大细胞脱颗粒模型对研究Ⅰ型超敏反应和抑制由IgE介导的过敏性疾病具有重要意义.从入骨髓及脐血中分离诱导培养的肥大细胞,成本昂贵、培养周期较长,因此获得永生化人肥大细胞系用于过敏反应研究显得格外重要.目前应用较多的肥大细胞系有大鼠嗜碱性粒细胞来源的RBL-2H3细胞,小鼠肥大细胞瘤P815细胞,人肥大细胞系有HMC-1细胞和LAD2细胞.人肥大细胞系HMC-1的IgE高亲和力受体(FcεRⅠ)表达水平低、颗粒含量少.新近建立的肥大细胞系LAD2细胞来源于一肥大细胞增多症患者的骨髓,由美国国立卫生研究院过敏性疾病实验室(laboratory of allergic diseases)建系成功,从表型、核型及过敏介质等方面证实了该细胞几乎包含完整的人原代培养肥大细胞的生物学特征].我们培养和鉴定了该肥大细胞系,建立了由IgE介导的人肥大细胞脱颗粒模型,方法 细胞培养于50ml的培养瓶中,每瓶5ml完全培养基.完全培养基包含Stem Pro-34 Nutrient Supplement、重组人干细胞因子.细胞密度应维持在0.5×106-1×106/ml,每周半量更换新鲜培养基.噻唑蓝(MTT)检测细胞生长曲线,细胞染色及电镜观察,Biotin-IgE致敏LAD2细胞,链霉亲和索(Streptavidin)攻击,测定组胺及β-氨基己糖苷酶的释放,判断LAD2细胞的激活效应.
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