为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M)，采用RT-PCR方法从狂犬病病毒LEP-Flury株中扩增RV基质蛋白基因，双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)，构建重组质粒pET-M，经PCR和双酶切鉴定以及序列测定，重组质粒构建成功。将重组质粒pET-M转化至宿主菌E-coli DH5a中进行表达，经SDS-PAGE电泳分析显示M蛋白约为38ku。Westem blot检测证明，重组蛋白可被鼠抗His单克隆抗体特异性识别，表明基质蛋白具有良好的反应原性。用纯化的重组M蛋白作为诊断抗原建立检测犬RV抗体的间接ELIsA方法，通过优化反应条件，确定抗原最佳包被量是6μg/ml，血清的最佳稀释度为1：200，Protein A—HRP的稀释度为l：2000，用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化EuSA试剂盒分别对93份临床血清样品进行检测，结果两者的符合率为89．2％。该试验表明M蛋白的间接ELISA方法可用于检测犬1w抗体水平的参考。