猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

来源 :中国畜牧兽医学会2010学术年会暨第二届中国兽医临床大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dhalbert
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本研究旨在建立一种针对猪圆环病毒2型特异、敏感的定量PCR方法.根据GsnBank中猪圆环病毒2型ORF 2基因序列的保守区域设计合成引物和探针,以该PMD-ORF2阳性重组质粒为标准品模板制作荧光定量PCR标准曲线.用该方法对临床采集的54份血清样品进行检测,并与常规PCR方法进行敏感性和特异性比较,结果显示:所建立的方法灵敏度可达10拷贝·μL-1,比常规PCR方法灵敏度高100倍,并且与猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)没有交叉反应;田间试验表明,54份血清样品中,常规PCR结果显示,50份呈PCR阳性;而荧光定量PCR检测结果显示,52份血清为阳性;其中50份PCR阳性的样品,定量PCR均为阳性.上述结果显示该方法适合用于PCV2的流行病学调查和临床诊断.
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