检测鸭瘟病毒PCR方法的建立及其在临床诊断和免疫与致病机理研究中的初步应用

来源 :中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第十次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:efanest
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
根据Genbank文献,用计算机分析并合成了1对用于扩增鸭瘟病毒(Duck Plague Virus,DPV)ECOR I基因765bp片段的引物,上游引物(P1)位于ECOR I基因的246-266位,下游引物(P2)位于ECOR I基因的727-744位,以DPV CHa株DNA为模板,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了检测DPV的PCR方法.应用该方法对DPV强毒株鸭胚培养物和弱毒株鸡胚培养物进行基因扩增,均可获得498bp的特异性DNA片段,而对正常鸭(鸡)胚和鸡马立克氏病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鸭副伤寒沙门氏菌和鸭疫里默氏杆菌进行检测,结果均呈阴性,没有出现交叉反应,对扩增产物进行测序的结果与文献报道的一致,证明PCR扩增产物与方法的特异性.对DPV CHa株鸡胚毒提取物DNA进行检测,其最低检出量为10fg.用病毒分离、Dot-ELISA和PCR三种方法检测1990-2002期间送检的临床样品,对所获得的结果进行X<2>分析,证明PCR检出率明显高于前2种方法.CHa株免疫雏鸭后对血液、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌头、肌肉、骨髓、粪便和食道共19种组织PCR检测结果表明①皮下接种后4h心、肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑和小脑阳性,8h全部19种组织阳性;②口服接种后4h舌头和食道阳性,8h心、肝、脾、肾、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌头、食道和血液阳性;③滴鼻接种后4h无阳性组织,8h后可在心、肝、脾、肾、胸腺、延脑、大脑、小脑、舌头、食道和血液阳性;④三种免疫途径的鸭从12h至第21天均能所有采组织中检测出DPV DNA.DPV强毒SC1株人工感染成年鸭2小时后即能够从脑、肝、脾、法氏囊、胸腺中检出DPV DNA.12小时后及其死亡鸭均可从心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、脑、胸肌、食道、腺胃、血液、舌头、口腔分泌物、皮肤、骨髓和粪便等20种组织器官中检测到DPV的DNA.研究表明建立的PCR可用于鸭瘟的快速诊断和分子流行病学调查,实验结果对阐明鸭瘟弱毒的免疫机理和强毒的致病机理提供了重要的实验数据.
其他文献
随着“中概股”在海外市场的大举受挫,VC在电商领域的投资趋于谨慎,加上运营成本的不断攀升和推广ROI的节节下挫,国内电商圈“寒冬将至”的传言越来越盛。  据深圳电子商务行业协会的数据显示,深圳注册运营的3700家电子商务公司,去年倒闭的近500家,占注册数的13.5%。而传统企业纷纷触网开辟网上商城,将进一步加剧缺乏传统业务根基的电商网站的倒闭风潮。    落实营销预算    面对第一波关门潮,广
本实验通过对2株鸡大肠杆菌菌毛之间的交叉保护性研究及对大肠杆菌菌毛(基因FimA)变异情况的比较与分析,希望通过PCR方法弄清菌毛抗原之间有无交叉保护作用.
本试验克隆并测定了这两株NDV强毒株的F基因重要功能区并鉴定基因型,与常用疫苗株Lasota进行序列比较,构建系统发育树.在分子水平探讨NDV强毒株抗原变异机制及毒力的分子基础
目前国内外对FDI的研究主要关注FDI东道国和母国双边的影响因素。本文在此基础上,将第三方国家经空间加权后的影响因素考虑进来,试图为这方面相对缺乏的实证研究提供补充。由于输入国市场间的依赖度与跨国公司的贸易有重要关联,我们将贸易成本(距离)作为空间权重,基于1995-2005年的美国输出FDI和中国输入FDI的面板数据,先忽略空间相关性,用传统的两国家三因素模型进行估计,而后使用近期发展起来的空间面板数据广义矩估计方法来建立新的复合FDI模型,对比两个模型可以发现第三方国家的影响是显著的。
在ELISA试验中对IgG的要求很严格,既要保证其纯度,又需有较高的生物活性.本文介绍了几种提纯IgG的方法,并将这种方法进行了比较.
劳动力流动引致的部门间劳动力配置结构的改变是实现经济结构转换的重要因素。本文利用省际面板数据模型的实证研究表明,城市化中的农村劳动力转移是促进城市服务业增长的重要
本文为了观察和验证白细胞介素-2在临床上对家禽免疫的作用,进行了免疫增效试验,试验结果表明,免疫鸡群用疫苗的同时使用白细胞-2能产生免疫并提高家禽免疫后的抗体水平.
为了检测鸡痘抗体,我们建立了间接ELISA检测鸡痘抗体的方法,该方法鸡痘病毒抗体的检出率是琼脂扩散方法的16倍.
ELISA是一种敏感性和特异性都很高的检测方法,目前已应用于多种疾病的检测,本文对间接ELISA和竞争ELISA方法进行了初步探索,以期建立一种能够快速、准确检测F抗体的ELISA方法
本研究实证探讨了我国国有部门和非国有部门的性别工资差异。分位数回归结果发现,性别工资差异存在“地板效应”而非普遍认为的“天花板效应”,且国有部门的性别工资差异明显低