论文部分内容阅读
目的:以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)为宿主菌构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素酶B(UreB)的食品级表达系统。方法:从重组质粒pMD19-T-ureB上酶切得到ureB基因片段,与含有筛选标记lacF基因的L.lactis表达载体pNZ8149经双酶切后,进行定向连接,连接产物应用PCR、酶切和测序的方法鉴定重组子。重组菌用乳联菌肽(Nisin)诱导表达,用正交表L25(53)进行表达条件的优化,通过SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定。结果:重组工程菌NZ3900/pNZ8149-ureB经鉴定表明与预期相符。通过SDS-PAGE和Western blot能检测到UreB表达,优化结果显示在菌体培养到OD600为0.4左右时加入终浓度为25μg/L的Nisin诱导5h产量最高。结论:构建了不含任何抗生素抗性基因选择标记的ureB基因食品级表达系统,且表达的重组具有免疫反应性。为进一步研发H.pylori的食品级口服疫苗提供研究基础。