【目的】从永生化人支气管上皮细胞BEP2D及α粒子辐射诱发该细胞发生癌变的细胞系BERP35T44-1中分离外泌体,筛选在BERP35T44-1细胞外泌体中表达增高的miRNAs。【方法】采用多步差速离心的方法从BEP2D及BERP35T44-1细胞中分离外泌体,并在电子显微镜下观察其形态;采用基因芯片技术对两种细胞外泌体中含有的微小RNA(micro RNA,miRNA)的表达谱进行差异分析,并采用实时定量PCR Real-time Quantitative PCR,qPCR)对其中五条差异表达miRNA进行验证。选取miR-7704、miR-4484两条差异表达显著的miRNA进行进一步的验证:将A549细胞皮下接种裸鼠致裸鼠成瘤,接种细胞六周时,通过眼眶取血的方法收集裸鼠全血,分离血清并提取总RNA,采用实时定量PCR对miR-7704、miR-4484的表达情况进行鉴定。【结果】从BEP2D及BERP35T44-1细胞中分离获得外泌体,形态为圆形或椭圆形,大小不一,直径约在30-100nm;miRNA芯片结果显示,从BERP35T44-1细胞与BEP2D细胞分离出的外泌体中,表达上调的miRNA有140个,表达下调的miRNA有169个。qPCR验证结果显示:miR-7704、miR-4484在BERP35T44-1细胞外泌体中表达增高。miR-7704、miR-4484进一步在成瘤裸鼠血清中的验证结果表明:与对照组相比,miR-7704、miR-4484在A549致瘤裸鼠血清总RNA中表达均上调。【结论】利用多步差速离心方法成功从BEP2D及BERP35T44-1细胞中分离得到外泌体;利用miRNA芯片得到一批在BERP35T44-1细胞外泌体中表达增高的miRNA。通过皮下接种A549的方法,成功建立裸鼠肺癌模型;利用qPCR对miR-7704、miR-4484在该裸鼠肺癌模型血清RNA中的表达情况进行分析,结果显示均表达上调。为下一步筛选临床肺癌诊断及预后判断的生物标志物打下基础。