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本文建立了一种利用高效液相色谱-串联质谱定量检测婴幼儿食品中牛乳铁蛋白的方法。试样经溶解稀释后，牛胰蛋白酶酶解，用含0.1％甲酸的水和乙腈作为流动相，经BEH300 C18反相色谱柱梯度洗脱后分离，优化选择LRPVAAEIYGTK作为牛乳铁蛋白的特异性标签肽，串联四级杆质谱多反应离子监测(MRM)方式检测，以内标法定量，通过牛乳铁蛋白与所选标签肽的等摩尔关系进而定量牛乳铁蛋白。该方法定量限为1.5 mg/100g，回收率在93.2～107.3％之间，RSD在3.9～7.3％之间。本法灵敏度高，重现性好，处理简便，且可适用于要幼儿食品和乳制品中热变性和非变性牛乳铁蛋白的快速批量定量测定。