【摘 要】
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[目的]本文旨在研究氯硝柳胺抗弓形虫RH株的体内和体外活性,并探讨其作用机制。[方法]用MTT法测定氯硝柳胺对人包皮成纤维细胞的细胞毒性;采用荧光定量PCR和Giemsa染色法测定
【机 构】
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中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室;
【基金项目】
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国家科技支撑计划项目(2015BAD11B01);国家现代农业产业技术体系专项(CARS-37)
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[目的]本文旨在研究氯硝柳胺抗弓形虫RH株的体内和体外活性,并探讨其作用机制。[方法]用MTT法测定氯硝柳胺对人包皮成纤维细胞的细胞毒性;采用荧光定量PCR和Giemsa染色法测定氯硝柳胺对弓形虫的体外抗增殖和抗入侵作用;通过BALB/C小鼠感染弓形虫RH株速殖子,建立BALB/C小鼠的急性感染模型,评价氯硝柳胺的体内抗虫活性;用JC-1染色和ATP水平测定,评价氯硝柳胺对虫体线粒体的影响。[结果]氯硝柳胺具有较低的宿主细胞毒性,半数抑制浓度为8.3μg/ml;氯硝柳胺抑制弓形虫速殖子的胞内增殖,其半数有效浓度为45.3 ng/ml;氯硝柳胺降低弓形虫速殖子感染宿主细胞(对照组感染率为17.8%,氯硝柳胺100 ng/ml治疗组感染率为1.9%)。在体内,氯硝柳胺在160、200或240 mg/kg·bw剂量时,可以保护部分弓形虫速殖子感染的BALB/C小鼠免于死亡,存活率分别为20%、40%和50%;此外,用荧光定量PCR检测240 mg/kg·bw的氯硝柳胺治疗后,可以显著降低急性感染小鼠血液和组织中的寄生虫荷载量。共聚焦显微镜观察结果显示,氯硝柳胺孵育后的弓形虫胞外速殖子线粒体膜电位(Δψm)下降,且荧光酶标仪测定药物孵育后胞外速殖子的三磷酸腺苷(ATP)水平显著降低。[结论]试验结果表明,氯硝柳胺具有较好的体内和体外抗虫效果,其作用机制可能与干扰弓形虫线粒体氧化磷酸化有关。氯硝柳胺有望成为治疗弓形虫感染的潜在化合物。
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