氯硝柳胺抗弓形虫RH株活性及机制探究

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[目的]本文旨在研究氯硝柳胺抗弓形虫RH株的体内和体外活性,并探讨其作用机制。[方法]用MTT法测定氯硝柳胺对人包皮成纤维细胞的细胞毒性;采用荧光定量PCR和Giemsa染色法测定氯硝柳胺对弓形虫的体外抗增殖和抗入侵作用;通过BALB/C小鼠感染弓形虫RH株速殖子,建立BALB/C小鼠的急性感染模型,评价氯硝柳胺的体内抗虫活性;用JC-1染色和ATP水平测定,评价氯硝柳胺对虫体线粒体的影响。[结果]氯硝柳胺具有较低的宿主细胞毒性,半数抑制浓度为8.3μg/ml;氯硝柳胺抑制弓形虫速殖子的胞内增殖,其半数有效浓度为45.3 ng/ml;氯硝柳胺降低弓形虫速殖子感染宿主细胞(对照组感染率为17.8%,氯硝柳胺100 ng/ml治疗组感染率为1.9%)。在体内,氯硝柳胺在160、200或240 mg/kg·bw剂量时,可以保护部分弓形虫速殖子感染的BALB/C小鼠免于死亡,存活率分别为20%、40%和50%;此外,用荧光定量PCR检测240 mg/kg·bw的氯硝柳胺治疗后,可以显著降低急性感染小鼠血液和组织中的寄生虫荷载量。共聚焦显微镜观察结果显示,氯硝柳胺孵育后的弓形虫胞外速殖子线粒体膜电位(Δψm)下降,且荧光酶标仪测定药物孵育后胞外速殖子的三磷酸腺苷(ATP)水平显著降低。[结论]试验结果表明,氯硝柳胺具有较好的体内和体外抗虫效果,其作用机制可能与干扰弓形虫线粒体氧化磷酸化有关。氯硝柳胺有望成为治疗弓形虫感染的潜在化合物。
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