【摘 要】
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为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)pp38基因和1.8-kbmRNA转录子基因间一双向启动子的活性。本研究以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因，构建了启动子以pp38方向转录的重组质粒pP(pp38)-EGFP和以1.8-kb方向转录的重组质粒pP(1.8-kb)-EGFP。将这二个重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(CEF)、MDV rMd5克隆株感染的CEF(rMd5-CEF)以及pp38基
【机 构】
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山东农业大学动物科技学院 泰安 271018;中国兽医药品监察所 北京 100081 山东农业大学
【出 处】
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中国畜牧兽医学会2007年学术年会
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为了研究鸡马立克氏病病毒(MDV)pp38基因和1.8-kbmRNA转录子基因间一双向启动子的活性。本研究以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因，构建了启动子以pp38方向转录的重组质粒pP(pp38)-EGFP和以1.8-kb方向转录的重组质粒pP(1.8-kb)-EGFP。将这二个重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(CEF)、MDV rMd5克隆株感染的CEF(rMd5-CEF)以及pp38基因缺失的MDV rMd5△pp38克隆株感染的CEF(rMd5△pp38-CEF)。结果只有在转染rMD5-CEF样品中才能检测到EGFP的表达；将上述二个EGFP重组质粒分别与能表达pp3S的重组质粒pcDNA-pp38共转染CEF和rMdS△pp38-CEF，在CEF中仍检测不到EGFP的表达，而在rMdS△pp38-CEF形成的空斑周围，能检测到EGFP的表达。结果提示pp38是该双向启动子发挥作用的必要条件，但该启动子活性的发挥仍需除pp38以外的其它因子的共同作用。将pcDNA-pp38质粒和pp24表达质粒pcDNA-pp24，以及EGFP表达质粒共转染无MDV感染的CEF时，能检测到EGFP的表达。核酸阻滞试验表明，pp38必须和pp24共表达时，才能和启动子结合，表现出阻滞现象。说明pp38和pp24可能以聚合体形式与启动子结合并增强启动子的转录活性。本研究还证明了该双向启动子在1.8-kb mRNA转录子方向的启动活性显著高于pp38基因方向。
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