【摘 要】
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p53诱导的基因3(p53-inducible gene 3,PIG3)是p53下游靶基因之一,具有一定的醌氧化酶活性,通过产生活性氧的形式参与p53介导细胞凋亡.目前发现PIG3能够参与DNA损伤早期反应,但其具体机制不清.目的：探讨PIG3参与DNA损伤早期反应的具体机制.方法：根据文献报道的PIG3干扰序列构建基于pSilencer4.1-Hygromycin载体的PIG3干扰质粒.将PIG
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京 100850
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p53诱导的基因3(p53-inducible gene 3,PIG3)是p53下游靶基因之一,具有一定的醌氧化酶活性,通过产生活性氧的形式参与p53介导细胞凋亡.目前发现PIG3能够参与DNA损伤早期反应,但其具体机制不清.目的：探讨PIG3参与DNA损伤早期反应的具体机制.方法：根据文献报道的PIG3干扰序列构建基于pSilencer4.1-Hygromycin载体的PIG3干扰质粒.将PIG3干扰质粒及GFP干扰质粒转染MCF7细胞后,200ug/ml Hygromycin B筛选PIG3稳定敲低的细胞系.构建成功的细胞系进行脉冲电泳、克隆形成、Western Blot、免疫荧光等实验.结果：PIG3敲低细胞在辐射后DNA损伤修复能力低于对照细胞；不同剂量照射后PIG3稳定敲低细胞的克隆形成率低于对照组；DNA双链断裂标志分子γ-H2AX的foci形成在PIG3敲低后明显减少,Kap-1824位丝氨酸磷酸化延迟.结论：PIG3参与DNA损伤修复应答,PIG3敲低引起细胞DNA损伤反应缺陷,DNA修复减弱及细胞辐射敏感性增强.PIG3影响辐射后ATM底物H2AX和Kap-1的磷酸化水平,PIG3可能通过影响ATM对底物的磷酸化而参与DNA损伤修复反应.
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