论文部分内容阅读
目的:探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝癌细胞株 HepG2、凋亡及凋亡相关基因Survivin、Caspase-3表达的作用,探讨其作用机制。方法:分别以12.5、25、50、100、 200、400 μ g/ml UDCA孵育肝癌细胞株HepG2,于6、12、 18、24、48、72h观测相关指标。采用MTT法和流式细胞术 (FCM)分别检测HepG2细胞生长抑制率、细胞周期和细胞凋亡指数,光学显微镜、电镜观察细胞形态,采用半定量RT- PCR法检测HepG2细胞中Survivin,Caspase-3基因表达的情况。结果:MTT法显示UDCA抑制肝癌细胞株HepG2增殖,且随药物浓度的增高和作用时间的延长,抑制细胞增殖的作用越强(6h,r=0.9775,P<0.01,24h,r=0.9259,P <0.01,72h,r=0.8352,P<0.05),倒置显微镜下观察到,以浓度为200μg/ml UDCA孵育肝癌细胞,细胞形态变小, 脱落细胞明显增多,并且孵育时间越长,存活细胞越少,电镜发现细胞凋亡特征,FCM-Annexin V/PI双染显示细胞凋亡指数随UDCA浓度的增加和孵育时间的延长而增高,以200 μg/ml UDCA作用于HepG2细胞,24h凋亡指数达(31.81± 1.82)%,而对照组仅为(9.72±1.68)%(p<0.01)。此时处理组 G0/G1期为(43.84±3.33)%,S期为(48.09±2.31)%,G2/M期细胞为(8.07±1.88)%。对照组三期细胞分别占(61.28±4.09) %、(21.83±2.21)%和(16.89±1.77)%。两组相比较,处理组 S期细胞增加(p<0.01),而G0/G1期、G2/M期显著减少(P <0.05)。半定量RT—PCR法检测发现,Survivin表达随作用时间延长逐渐减弱,同时Caspase-3基因表达渐增加。200 μg/ml UDCA作用24h和48h,Survivin/β-actin分别为0.086±0.0172和0.031±0.0181(对照组为0.235± 0.0179和0.243±0.0192),Caspase-3/β-actin分别为 0.178±0.0191和0.223±0.0201(对照组为0.022±0.0165 和0.024±0.0148)。两组比较,p<0.01。结论:UDCA能有效抑制肝癌细胞株HepG2增殖,阻滞细胞于S期,诱导细胞凋亡,并具有浓度、时间依赖性。UDCA可能通过影响 Survivin对Caspase-3活性的负调节,来调控肝癌细胞的增殖与凋亡。