目的：建立同时测定野罂粟碱、黑龙辛甲醚及瑞芙热米定三种主要生物碱含量及快速检测野罂粟总生物碱含量的方法,并对不同居群野罂粟进行测定；此外,以生物碱类成分的含量为指标,进行聚类分析。方法：采用超声辅助法提取样品,外标法定量,采用LCMS-IT-TOF法对野罂粟全草进行定性分析,采用溴甲酚绿酸性染料比色法测定野罂粟的总生物碱含量,采用UPLC-MS法测定野罂粟碱、黑龙辛甲醚及瑞芙热米定三种主要生物碱含量。结果：通过LCMS-IT-TOF法对野罂粟全草的定性分析,初步得到13个生物碱成分,基本确定了其中8个主要生物碱成分。同时,对野罂粟总生物碱(TAPN)及3个主要生物碱成分(瑞芙热米定、野罂粟碱与黑龙辛甲醚)的定量分析结果表明,各成分的含量均表现出较大的变异性,其中以HGL样地的综合品质为最优。聚类分析结果显示不同居群野罂粟分成两大组,其中WRBT、HGL和HS等3个居群聚为聚为第Ⅰ组；DL1、DL2、 HHG1、HHG2、ARS、EWK、XJG、HLE与ERGN等9个居群第Ⅱ组；其中,DL1与DL2聚成一小J、组；HHG1、HHG2、ARS、EWK、XJG、HLE与ERGN等7个居群聚为另一小组；其中,EWK、HLE与ERGN聚为一小组,HHG1、HHG2、XJG与ARS等4个居群则聚成另一小组。结论；本法经方法学验证可以作为野罂粟药材质量评价方法。不同居群野罂粟含量测定结果说明,罂粟碱、黑龙辛甲醚及瑞芙热米定及总生物碱4中成分含量差异及聚类分析表明药材品种与其生长环境有相关性,可为野罂粟药材资源的合理使用及道地药材野罂粟的产地渊源系统的建立提供参考。