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牛瑟氏泰勒虫病(Theileriosis Sergenti)是由经蜱传播的泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(Theileri sergenti)寄生于牛体内引起的一种血液原虫病,其主要临床症状为高热、消瘦、贫血、出血和体表淋巴结肿大.随着养牛业的迅速发展和经济贸易的全球化,各国之间品种牛以及牛类产品的交流日趋频繁,牛瑟氏泰勒虫病的流行区域正日益扩大,已成为严重威胁养牛业健康发展的重要疾病之一.酵母双杂交技术具有高效性、方便性、快捷性和可在细胞内进行,在诞生的二十多年来已经成为研究蛋白质-蛋白质相互作用的重要手段.如今,这一技术被越来越多的实验室所采用.目前,国内外在牛瑟氏泰勒虫病的病原学和诊断技术等方面的研究虽然取得了一定进展,但关于牛瑟氏泰勒虫宿主互作蛋白方面的研究还未见有报道.为了研究牛瑟氏泰勒虫与牛外周血单个核细胞之间蛋白的相互作用,以自然感染瑟氏泰勒虫的牛外周血单个核细胞为材料,提取总RNA.利用美国Clontech公司的SMART技术构建牛外周血单个核细胞的酵母双杂交cDNA文库.将总RNA合成cDNA第一链之后,在反应体系中加入修饰好的SMART ⅢOligo,让cDNA第一链与mRNA接近完全互补,通过长距离PCR(LD-PCR)合成双链eDNA.将纯化后的双链cDNA与线性质粒PGADT7-Rec连接,转入酵母细胞Y187感受态中,用PEG/LiAc法完成转化.双链cDNA与PGADT7-Rec利用酵母细胞内具有较高的同源重组酶活性,形成有复制活性的文库质粒,在SD/-Leu培养板上筛选出所有克隆.之后通过倍比稀释法计算转化率和文库的容量,通过菌落PCR计算重组率和插入片段的大小.结果显示,提取的牛外周血单个核细胞的总RNA浓度为1020ng/ul,OD260/OD280为1.97,1％琼脂糖凝胶电泳后清晰可见28S和18S条带.纯化后双链cDNA的凝胶电泳结果显示,片段大小在0.4～2.0 kb之间.文库鉴定结果显示,本次构建的cDNA文库容量为4.0× 108 CFU/mL,文库的重组率达到95％以上,平均插入片段的大小为700bp左右.以上实验结果说明本研究建立的cDNA文库质量比较高,达到了后续酵母双杂交筛选受体蛋白的要求,为牛瑟氏泰勒虫宿主蛋白的筛选提供了重要的材料和基础.