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引言白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)具有促进Th2型细胞分化,刺激T、B淋巴细胞增殖与分化,可作为疫苗佐剂发挥其免疫增强作用;白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)可促进T细胞生长与分化,诱导CTL、NK细胞细胞分泌Th1型细胞因子,从而提高机体的细胞免疫能力;将IL-2与IL-6联合应用可发挥更强的协同免疫增强作用。本研究前期的研究结果已证明表达纯化的重组鸡白细胞介素-6/白细胞介素-2(重组复合蛋白,rChIL-6-Linker-ChIL-2)在体内外均具有与抗ChIL-6单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性反应的免疫原性,且均具有促鸡外周血T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖活性。本研究在此基础上进一步研究重组复合蛋白应用鸡体后对鸡淋巴细胞亚群的影响,并与重组鸡ChIL-6(rChIL-6)和ChIL-2蛋白(rChIL-2)进行比较,以揭示重组融合蛋白在鸡体内增强细胞免疫和体液免疫功能的作用机理。材料与方法重组复合蛋白、rChIL-6、rChIL-2均由河南省动物疫病预防控制中心保存;28日龄SPF鸡由乾元浩郑州生物药厂提供;流式细胞仪(FACS Calibur)为美国BD公司产品;将实验动物分为PBS组、重组复合蛋白组、单一rChIL-6组、单一rChIL-2组、rChIL-6+rChIL-2混合组,于28日龄进行蛋白注射,于接种前(0 dpi)以及接种后的不同时间(dpi)采集一次抗凝血和脾脏。采用MTS法分别测定不同时期各组鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾脏B淋巴细胞的增殖活性;采用流式细胞术对不同时期各组鸡外周血T淋巴细胞中CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+百分含量以及CD4~+/CD8~+比值进行检测。结果与讨论结果表明:7 dpi~35 dpi,重组复合蛋白、rChIL-6、rChIL-2、rCHIL-6+rChIL-2混合蛋白均具有良好的促T、B淋巴细胞增殖活性,重组复合蛋白组和rChIL-6+rChIL-2混合蛋白组促鸡T、B淋巴细胞增殖活性显著优于单一蛋白使用组(P<0.05),各蛋白接种组在14 dpi~21 dpi期间,鸡T、B淋巴细胞的增殖活性曲线达到峰值;重组复合蛋白、rChIL-6、rChIL-2和rChIL-6+RChIL-2混合蛋白在7 dpi~21 dpi期间均可显著提高鸡外周血T淋巴细胞中CD3~+CD4~+细胞百分含量、降低CD3~+CD8~+细胞的百分含量、提高CD4~+/CD8~+比值;7 dpi~21 dpi期间,重组复合蛋白组鸡的CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+细胞含量及CD4~+/CD8~+比值与单一蛋白对照组相比差异均显著(P<0.05);由此可见,重组融合蛋白具有良好的促进T、B淋巴细胞增殖的活性,提高外周血中CD4~+/CD8~+比值,增强机体的体液免疫和细胞免疫;重组复合蛋白对鸡淋巴细胞亚群百分含量、CD4~+/CD8~+比值影响程度和细胞免疫功能的增强作用优于单一rChIL-6蛋白或rChIL-2蛋白;重组复合蛋白在体内发挥了ChIL-6、ChIL-2对细胞免疫和体液免疫功能的协同增强作用。