刺激隐核虫LAMP检测方法的建立

来源 :2013海水养殖鱼类病原与病毒控制工程论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luoqiuqiu80
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  为提高大黄鱼刺激隐核虫病的病原体检出率,本研究针对刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)18S-ITS2基因序列,设计了4条LAMP引物,在内外引物浓度比2∶1~6∶1、Mg2+浓度2mmol/L、反应温度61c~66℃、反应时间60min的优化条件下,扩增产物经电泳后呈现特异性的LAMP梯形条带,建立的LAMP法具有高灵敏度,达到10-7 ng/μL DNA浓度,比常规PCR方法高100倍。将该方法应用于取自不同地域采集的虫体样本、病鱼和水样、以及不同组织样品的检测,结果在13份样品中有10份检出为阳性,并显示该方法既能检测发病鱼,又能检出已感染但未发病的病鱼。实验表明,该方法是一种能快速、简易、特异、敏感的检测海水鱼类刺激隐核虫病的病原学诊断方法。
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