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目的 缺血性脑卒中是造成死亡和残疾的主要原因之一,但目前有效的治疗药物非常少.寻找新的治疗靶标将有助于发展新的缺血性脑卒中治疗药物.烟酰胺磷酸核糖转移酶(简称Nampt)是哺乳动物细胞内NAD+合成的限速酶,控制着细胞内的NAD+浓度,决定着细胞在应激下的命运.目前,关于Nampt在缺血性脑卒中的发生、发展及转归过程中的作用,仍是空白.本研究将对此进行研究.方法 采用整体动物和离体细胞的结合,主要使用大、小鼠的大脑中动脉堵塞模型(MCAO)和原代神经元细胞进行研究.运用了多种药理学和基因干预手段,例如Nampt的特异性酶抑制剂FK866、Nampt的酶产物NMN、慢病毒介导的Nampt过表达和RNA干扰等开展研究.使用免疫荧光双染、real-time PCR、Western blotting、流式细胞术、细胞活力、LDH释放、MAP2染色、脑室及脑局部微注射、免疫共沉淀、TUNEL染色等多种技术.最后,利用AMPK-2和SIRT1基因敲除动物,对Nampt的神经保护作用的机制进行了深入探讨.结果 Nampt在脑中主要表达于神经元细胞.在MCAO模型和缺氧缺糖处理的原代神经元细胞上,Nampt显著上调.在易卒中型高血压大鼠上,长期服用FK866可加速脑卒中的发生.FK866加重MCAO模型的脑损伤和缺氧缺糖导致的神经元损伤.这些作用可被Nampt酶产物NMN补充所逆转.使用慢病毒在脑局部或者在神经元上过表达Nampt,可减轻MCAO或缺氧缺糖导致的神经损伤.AMPK激活有神经保护作用.而过表达Nampt可进一步增加缺血或缺氧缺糖导致的AMPK激活,RNA干扰Nampt则可以抑制AMPK激活.AMPK的化学抑制剂Compound C可取消Nampt的神经保护作用.此现象在AMPK-2敲除动物的神经元细胞上得到进一步证实.Nampt与AMPK共表达于神经元细胞,但二者之间却无直接相互作用.Nampt可通过控制NAD+合成来调控SIRT1的去乙酰化能力.AMPK的上游激酶LKB1,其乙酰化和细胞内的重分布均可受SIRT1调节.最后,在SIRT1和AMPK-α2的基因敲除动物上,Nampt的神经保护作用被取消.结论 Nampt可通过其酶活性,控制NAD+的合成,影响SIRT1的活性,调节LKB1的去乙酰化和细胞内重分布,最终调控AMPK的激活,发挥其神经保护作用.