【摘 要】
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目的：建立一种特异、灵敏的荧光定量PCR检测尿液、血液UCA1mRNA方法.方法：以构建的pcDNA3.1/UCA1重组质粒作为标准品，建立荧光定量PCR检测UCA1mRNA的标准扩增体系，绘制标准曲
【机 构】
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西安交通大学医学院第一附属医院分子医学实验室,陕西西安,710061
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目的：建立一种特异、灵敏的荧光定量PCR检测尿液、血液UCA1mRNA方法.方法：以构建的pcDNA3.1/UCA1重组质粒作为标准品，建立荧光定量PCR检测UCA1mRNA的标准扩增体系，绘制标准曲线.并对其特异性、灵敏性、重复性、线性范围和最低检测限进行鉴定.同时，对24例膀胱癌组以及30例泌尿系统非膀胱癌组(包括肾癌、前列腺癌、前列腺增生和膀胱炎等)的尿液和血液进行方法学临床标本验证.结果：该方法建立的标准曲线线性好、具有良好的梯度.检测灵敏度可达10拷贝，检测的线性范围在10-108拷贝之间；经对扩增产物纯化后，直接测序分析并进行Blast同源性比较，序列与UCA1完全吻合；经检测具有良好的稳定性和重复性.对膀胱癌组、泌尿系统非膀胱癌组(包括肾癌、前列腺癌、前列腺增生和膀胱炎等)以及健康对照组的尿液和血液进行UCA1mRNA检测，发现膀胱癌组阳性率高于其他系统肿瘤和健康对照组(P＜0.01).结论：本研究建立了一种特异、灵敏、重复性好、线性范围大的检测膀胱癌特异性非编码RNA-UCA1的新方法，将为膀胱癌诊断与疗效判断提供了一个新的技术手段.
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