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研究背景:妊娠滋养细胞疾病是一组与妊娠有关的、来自绒毛或绒毛外滋养细胞的异常妊娠或肿瘤。葡萄胎是其中最常见的形式,是以胎盘绒毛水肿和滋养细胞增生为特征的异常妊娠;葡萄胎具有很高的发展成癌症的潜能。miRNA是一组在真核生物中广泛存在的、长约21～25个核苷酸的非编码RNA。通过与其靶基因mRNA分子的3’端非编码区域(3’-UTR)互补配对导致该mRNA分子被降解或者是翻译抑制,是一种天然的RNAi诱导分子。已有很多文献报道,miRNA分子参与肿瘤的发生发展。B3GNT5(β1,3-N-Acetylglucosaminyltransferase 5)属于β1,3糖基转移酶,是Lc3的合成酶,B3GNT5能把GlcNAc加到乳糖神经酰胺上,负责合成lacto/neolacto-series鞘糖脂。鞘糖脂在白血病、卵巢癌、脑胶质瘤存在异常表达。已有研究表明,B3GNT5可以影响细胞膜上的鞘糖脂富集区中的蛋白分子,例如Src分子。本研究拟探讨miR-30a是否靶向B3GNT5,是否通过影响B3GNT5来影响细胞膜上的蛋白分子EGFR及其信号通路,材料与方法:研究采用RT-PCR、免疫组织化技术分析临床葡萄胎样本和正常胎盘组织中miRNA-30a、B3GNT5的表达差异;体外以绒毛或绒毛外滋养细胞(人绒毛膜癌细胞JAR、BEWO细胞系)为研究模型,以miR-30a mimics、miR-30a inhibitor转染调控JAR、Be Wo细胞mi RNA-30a基因表达,CCK8实验及克隆形成实验检测调控miRNA-30a对JAR、Be Wo细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测调控miR NA-30a对JAR、BeWo细胞周期及其凋亡的影响;Transwell实验检测调控miRNA-30a对JAR、BeWo细胞迁移、侵袭能力的影响;运用生物学软件预测miR-30a靶基因,通过RT-PCR、western blot双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a与B3GNT5基因的靶向关系。脂质体共转染miR-30a mimics和B3GNT5过表达、或共转染miR-30a inhibitor和siB 3GNT5,分析对JAR、BeW o细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。RT-PCR、western blot检测调控miR NA-30a、B3GNT5对EGFR/PI3K/AKT信号通路影响,逐步揭示miR-30a-5p靶向B3GNT5对葡萄胎的影响及其作用机制。实验结果:临床样本葡萄胎与正常胎盘组织对比miR-30a表达降低且差异显著,B3GNT5表达升高且差异显著;生物学软件预测结果 miR-30a与B3GNT5存在靶向关系,双荧光素酶报告基因实验和western blots实验进一步验证miR-30a与B3GNT5存在靶向关系。miR-30a mimics上调JAR、Be Wo细胞中miR-30a的表达且抑制细胞的增殖、细胞周期、迁移及侵袭,并促进细胞凋亡;miR-30a inhibitor下调JAR、BeWo细胞中miR-30a的表达且促进细胞的增殖、细胞周期、迁移及侵袭,并抑制细胞凋亡;上调miR-30a,其靶蛋白B3GNT5的表达呈下降趋势;下调miR-30a,其靶蛋白B3GNT5的表达呈上升趋势。共转染miR-30a mimics和B3GNT5过表达之后,共转染组的细胞增殖、迁移、侵袭能力均较miR-30a mimics组具有回调上升现象且具有统计学差异,共转染组B3GNT5蛋白表达较miR-30a mimics组呈上升趋势;共转染miR-30a inhibitor和B3GNT5干扰之后,共转染组的细胞增殖、迁移、侵袭能力均较miR-30a inhibitor组具有回调下降现象且具有统计学差异,共转染组B3GNT5蛋白表达较miR-30a inhibitor组呈下降趋势;上调miR-30a,western blot检测EGFR表达下调;同样,下调B3GNT5之后,EGFR表达也降低。以上结果初步揭示miR-30a与B3GNT5在葡萄胎中均表达异常,且存在靶向关系;miR-30a通过靶向B3GNT5影响EGFR的表达进而影响EGFR/PI3K/AKT信号通路。