研究背景及目的： 联合化疗是目前治疗白血病的主要方法。化疗成功的主要障碍是白血病细胞对化疗药物产生交叉多药耐药MDR性，进一步深入开展MDR的实验和临床研究，探讨耐药机制，并寻找疗效好、毒性低的逆转剂，是当前国内外耐药研究的热点之一。肿瘤细胞MDR1基因过度表达，导致其细胞膜上分子量为170×103道尔顿的P糖蛋白P-glycoprotein，P-gp或CD243增多是产生MDR的主要机制。环孢霉素AcyclospofinA，CSA和维拉帕米Verapamil，VER是比较公认的经典逆转剂，然而对这两种药物在临床上的有效联合效果尚未完全明确。本研究拟采用Calcein-AM(C-AM)作为荧光指示剂，观察其在K562和K562/VCR细胞中的变化以及VER和CsA对C-AM在K562和K562/VCR细胞中摄取与排出的不同影响，研究Calcein-AM在评价P-gp泵功能中的作用，为寻找更为有效的MDR逆转剂奠定基础。 材料与方法： K562和K562/VCR细胞膜P—gp和MRP检测分别经直接及间接免疫荧光法染色后采用流式细胞术进行。C-AM对细胞生长及其存活率的影响采用C-AM加入细胞后培养，分别在12、24、36、48、72、96、120、144h取出细胞经PBS洗涤后上FCM进行碘化丙啶荧光强度分析，同时用1％台盼兰染色后分别计数活细胞。采用C—AM与逆转剂VER、CsA以及VER+CsA同时加入细胞中进行培养以观察逆转剂及其组合对细胞摄取C—AM的影响。采用C—AM染色细胞，然后再加入逆转剂及其组合来观察逆转剂对细胞内C—AM的外排作用。所有数据采用SPSSl0．0线性回归或两因素方差分析进行统计学处理。 结果： P-印和MRP在不耐药的K562细胞上不表达，而在耐VCR的K562/VCR细胞则表达P-gp，阳性率为61．69％。加用VCR后测定K562/VCR的耐药倍数为1287倍于K562。CsA，VER和CsA+VER不能明显增加VCR对K562细胞的敏感性，而能明显增加其对K562/VCR细胞的敏感性，但与K562/VCR细胞对VCR的耐药倍数高达1287倍相比，CsA，VER．及CsA+VER对K562/VCR细胞的耐药性均属于部分逆转。C—AM在活细胞内滞留的动态观察研究表明，经孵育仅30分钟后FCM检测，K562和K562/VCR细胞中即有很强的荧光强度，以24小时内最为明显，染色后48小时，K562细胞和K562/VCR细胞内C—AM已基本排出；K562细胞内的C—AM荧光强度各个时间点(0、12、24、36、48、72和120 h明显高于K562/VCR细胞(第48和第120h P值<0.05，其余P值均<0.01)。与K562细胞相比，CsA，VER和CsA+VER能明显增加K562/VCR细胞对C-AM的摄取，并呈时间-剂量关系，以CsA在120rain时，K562/VCR细胞对c—AM的摄取尤为明显(P均<0.01)。CsA，VER和CsA+VER对K562细胞内C—AM的外排无明显影响，但它们能明显减少K562/VCR细胞内的C-AM的外排，其中CsA组最大增加达1.68倍，而在VER组和CsA+VER组最大分别增加1.22倍和1.39倍。 结论： 1．C-AM是一种P-gP作用底物，是研究P-gP泵功能的良好指示剂；P-gp的表达能减少K562/VCR细胞对C—AM的摄取和增加细胞对C-AM外排。 2．CsA和VER单独使用能增加K562/VCR细胞对C-AM的摄取与减少对C-AM的外排，但两者联用并不明显增加其对C-AM的摄取或减少对C-AM的外排；CsA，VER和CsA+VER能增加K562细胞对C-AM的摄取，但对C—AM的外排影响不明显。 3．通过使用C-AM和FCM，可以比较迅速、简便评价白血病细胞P-gP的功能，有利于临床合理使用逆转剂，并为寻找新的逆转剂奠定了基础。