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目的:探讨cyclinD1过表达对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、分化的影响及相关信号分子的变化规律.
方法:设计引物,PCR扩增cyclinD1基因全长,构建cyclinD1-pcDNA3.1质粒转染SiHa细胞,筛选cyclinD1稳定过表达细胞系.采用RT-PCR、Western blot检测转染细胞cyclinD1基因的mRNA和蛋白表达;MTT法绘制细胞生长曲线;RT-PCR、Western blot检测转染细胞Ck7、E-caderhin、vimentin、snail基因的mRNA和蛋白表达;RT-PCR检测增殖分化相关基因CDK4、CDK2、p21、p27、cyclinE、Rb、E2F、E6/E7、ki67基因的mRNA表达水平;对细胞同步化处理,RT-PCR检测细胞周期不同时间点cyclinD1/p21基因的mRNA表达变化.
结果:成功构建cyclinD1稳定过表达细胞株G-3,其mRNA与蛋白表达均明显升高;生长曲线及ki67mRNA升高显示G-3细胞增殖速度加快;G-3细胞中,vimentin、snail基因和蛋白表达明显增加,E-caderhin、Ck7基因和蛋白明显降低,显示转染细胞发生了上皮间质表型转化;cyclinD1过表达后,CDK4、CDK2、p21、p27、cyclinE表达增加,Rb、E2F、E6/E7、p16表达无明显改变;p21与cyclinD1表达趋势基本一致,在细胞周期不同时间点存在波动性,在G1晚期表达量最高;
结论:cyclinD1在HPV16阳性的子宫颈癌SiHa细胞中低表达,基因转染诱导cyclinD1过表达,可促进SiHa细胞增殖和上皮间质表型转化,这一过程中伴随着CDK4、CDK2、p21、p27、cyclinE基因表达的上调;cyclinD1过表达时,p21表达量同步增高,可能通过影响vimentin表达参与了SiHa细胞上皮间质表型转化的调控.