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盾壳霉(Coniothyriumminitans)是核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)的重寄生真菌,在菌核病防治中有重要的应用前景,但国内盾壳霉孢子的商品化及其应用相比于国外还存在差距.因此,提高盾壳霉的产孢能力,促进盾壳霉的规模化生产,对19核盘菌防治有重大的意义.通过对酵母和构巢曲霉MAPK途径分析,筛选到与已知的孢子形成相关基因SMK1同源的盾壳霉基因CmSmk1.通过克隆该基因全长为1155bp,含有1个内含子,编码355个氨基酸蛋白.Realtime PCR分析CmSmk1在盾壳霉中随培养时间的延长,其表达量逐渐上调,且产孢阶段(＞72h)表达量高于未产孢阶段(＜72h)表达量,表明CmSmk1可能与盾壳霉产孢相关.此外,在盾壳霉菌株ZS-1和核盘菌菌株EP-1 PNA367共培养条件下,CmSmk1的表达量下调,推测CmSmk1的表达可能在盾壳霉与核盘菌互作时受到抑制.为了验证CmSmk1在盾壳霉中的功能,构建了CmSmk1基因的敲除载体和互补载体,利用农杆菌介导技术现已获得多个CmSmk1的敲除转化子.敲除转化子与出发菌株ZS-1相比,生长速度并无差异,菌落为白色,不产生分生孢子,产色素能力与寄生菌核能力均降低,说明CmSmk1与盾壳霉生长无关,但影响产孢功能.CmSmk1敲除转化子过氧化氢含量显著高于出发菌株ZS-1,说明CmSmk1与盾壳霉内过氧化氢的产生相关.在敲除转化子中与有丝分裂相关基因以及黑色素形成基因的表达量均显著低于出发菌株ZS-1,说明CmSmk1可能在有丝分裂和黑色素形成过程中起重要作用.同时通过酵母双杂交验证CmSmk1蛋白不与CmHog1和CmSlt2互作,说明不参与HOG-MAPK和CWI-MAPK信号途径.