【摘 要】
：
目的 构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,为研究DJ-1M26I突变与细胞增殖、凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础.方法 采用突变试剂
【机 构】
：
中国医科大学实验动物部,沈阳,110001
论文部分内容阅读
目的 构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,为研究DJ-1M26I突变与细胞增殖、凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础.方法 采用突变试剂盒将DJ-1蛋白第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,并采用脂质体介导的方法分别将其转染入NIH3T3细胞,500μg/mL G418压力筛选稳定克隆,对2种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和AnnexinⅤ-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测.结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率低于正常NIH3T3细胞组(P＜0.05),转染D J-1基因的NIH3T3阳性细胞细胞增殖速率与正常NIH3T3细胞相比无明显差别；细胞凋亡检测表明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞细胞凋亡率高于正常NIH3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞细胞凋亡率低于正常NIH3T3细胞(P＜0.05).结论 成功构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达质载体,成功筛选出稳定表达D J-1及DJ-1M26I的NIH3T3细胞.DJ-1M26I基因突变更易导致NIH3T3细胞的凋亡.
其他文献
目的 观察异种蛋白诱导的肝纤维化模型大鼠肝组织的动态病理改变规律.方法 雄性Wistar大鼠60只,随机分为2组,空白组8只不予任何处理；实验组52只在34天内皮下注射含4mg人白
【摘 要】在美术欣赏活动中，知识面广，综合性强是主要的特点。问题设置是否合理，直接影响着思维的激发，情绪的形成，探讨的产生，及观点的呈现。 【关键词】封闭式提问；开放式提问；发散性 新课程实施以来，教师们越来越注重师生的互动，课堂上的提问不是简单的寻求一种答案，而是要切中要害、引人发思，激活学生的思维，引发学生积极主动地探究。多提开放式问题，少提封闭式问题，激发学生自我问题意识和探究精神。
生活与家电与传统音响体积大、音质差形成鲜明对比的是一些个性化、时尚化、体积小、超强震憾的卫星式家庭小影院,这些小影院紧扣21世纪“简便、实用、休闲”的生活主体,融
目的 探讨快速胚胎冷冻在致癌性转基因动物模型C57-ras小鼠保种繁殖中的应用.方法 对4周龄的正常C57BL/6J雌鼠进行超数排卵和选取性成熟C57-ras转基因阳性雄鼠进行交配，分
目的 观察非诺贝特对大鼠慢性非酒精性脂肪肝模型的影响.方法 采用灌胃高糖高脂乳剂建立大鼠慢性非酒精性脂肪肝模型,观察非诺贝特对模型大鼠血脂、肝脂等指标的影响.结
“线”作为一种独特的绘画语言,在中西方绘画中均得到充分的运用。但由于中西方文化的不同,他们对线条的理解有着本质的区别。西方绘画中,线只是对形的依附,是面与面的转折处
儿童摄影中,眼神、表情与姿态的引导十分关键,它直接关系到拍摄的成功与否。一般来说,儿童心理具有以下特点:好模仿心理:宝宝半岁左右就能模仿简单的表情;到了两岁的时候,就
目的 实验动物质量决定了实验动物标准化程度，对动物实验的结果起着关键作用，包括微生物和寄生虫、遗传学、营养学和环境生态学。本文结合笔者认识及工作实践，就动物使用过
KDDI发表了支持手机服务“au”、可以拍摄动态图像及发送电子邮件附件的手机“A5301T”（由东芝制造）。该公司首次实现了支持“电影手机”服务的手机的产品化。新款“A5301T”手
近来IT业出了一件不大不小的事,搞到IT业内外的企业有点心慌慌.去年下半年,麦肯锡(美国著名咨询机构)在一份郑重其事的研究报告中说:“在绝大部分经济领域中,在IT方面的大幅