【摘 要】
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本文旨在研究海参基质金属蛋白酶(MMP)及其内源性抑制剂(TIMP)基因的克隆及其在自溶过程中的表达情况.首先,提取海参肠RNA,逆转录后采用PCR扩增及RACE,得到MMP及TIMP基因
【机 构】
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大连工业大学食品学院,国家海洋食品工程技术研究中心,大连 116034
【出 处】
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中国食品科学技术学会第十届年会暨第七届中美食品业高层论坛
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本文旨在研究海参基质金属蛋白酶(MMP)及其内源性抑制剂(TIMP)基因的克隆及其在自溶过程中的表达情况.首先,提取海参肠RNA,逆转录后采用PCR扩增及RACE,得到MMP及TIMP基因序列.采用实时荧光定量RT-PCR法检测其在海参六种组织及自溶过程中的表达水平.MMP全长cDNA 1691 bp,5非编码区(UTR) 10bp,3UTR 157 bp,开放阅读框(ORF) 1524 bp,编码507个氨基酸；TIMP全长cDNA 721 bp,5UTR 21 bp,3UTR 121 bp,ORF 579 bp,编码192个氨基酸.呼吸树的MMP基因相对表达量(△△Ct)值最高,体腔细胞的TIMP相对表达量最高；海参自溶过程中两个基因的表达量均呈现先上调后下降的趋势,自溶6h和8h,管足和背部上皮组织的MMP表达量出现最大值,分别是0h的3.75倍和2.22倍.而同一时间点,TIMP基因表达量在上述两种组织中的表达量分别是0h的3.48倍和3.72倍.管足中MMP表达量的增加幅度略大于TIMP,而背部上皮中MMP表达量的增加幅度则低于TIMP.结果提示,海参组织中MMP和TIMP表达的平衡被打破,这很可能是导致海参结构蛋白降解,发生自溶的主要原因之一.
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