山羊MSTN基因打靶载体的构建与鉴定

来源 :第六次全国动物生物技术学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sandybobo
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根据绵羊、猪、小鼠和牛的Myostatin(MSTN)基因序列,设计引物,通过PCR方法扩增了山羊MSTN基因的5同源臂和3同源臂,其长度分别为5.2kb、1.1kb.在ploxPneo载体的neo基因上游和下游分别插入上述两个同源臂,经PCR、限制性内切酶鉴定及DNA序列测定,成功构建了山羊MSTN基因打靶载体.
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本研究选取全同胞小鼠、近交系小鼠和同等饲养水平同样环境下饲养,是为了最大程度上避免物种遗传上的差异和后天环境的影响。本研究中进行活菌计数的9种菌是小鼠肠道微生物菌群主要组成菌种,基本可以代表小鼠肠道微生物菌群结构和微生物环境。因而他们也可以作为转基因动物肠道微生物安全性评价的主要菌群,其中双歧杆菌、乳酸杆菌、拟(类)杆菌、梭菌、大肠杆菌和肠道球菌是哺乳动物消化管道内的优势菌群,而且这些菌群和哺乳动
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本试验构建了小鼠野生型和突变型MSTN和EGFP的融合基因表达载体,旨在研究Myostatin基因导致肌肉萎缩的分子机制并探讨利用该基因突变体实现基因治疗的可能性,具有重要的理论和实践意义.
会议
为了寻找一种更为简便的促生长和预防肌肉萎缩方法,本试验以小鼠为模式动物,旨在初步探讨Myostatin基因免疫对肌肉发育的影响以及对肌肉萎缩的预防作用,为进一步筛选促进肌肉生长发育和预防肌肉萎缩的高效疫苗奠定了重要基础.
本文通过对人乳铁蛋白(hLE)、人溶菌酶(hLYZ)转基因山羊与正常奶山羊的一系列性状指标进行比较,来研究转基因对山羊生长与繁殖等产生的影响。
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本研究将锌指核酸酶技术与猪体细胞核移植技术相结合,期望建立大动物高效基因打靶的技术平台,实现猪Ppar-y基因的单等位基因敲除。
牛FSTN基因及pMD18-T-FSTN的PCR扩增结果表明获得了预期大小片段,测序结果说明扩增的目的片段准确无误。经酶切及PCR鉴定表明成功构建了真核表达载体pIRES2-AcGFP1-FSTN。真核表达载体pIRES2-AcGFP1-FSTN的构建成功,为促进肌肉生长的转基因优质肉牛品种培育奠定了基础。